各種齧歯類モデルで内圧分析を用いた膀胱補強のためのバイオマテリアルの評価

手術の方法 1。手術の準備と麻酔必要な手術器具を滅菌した手術野を設定します。シェービングハサミ、歯鉗子、微細な非外傷性ピンセット、細針ドライバ、ガーゼ、Metzenbaumはさみ、腱のはさみ、メス刃、30ゲージの皮下注射針、生理食塩水1 mLシリンジ、4つを満たした6から0ポリプロピレン縫合糸、7から0ポリグラクチン縫合糸、4から0ポリグラクチン縫合。 誘導チャンバ内のイソフルラン吸入で動物を麻酔。手術のフィールドに転送する前に、動物の完全な誘導を確認してください。吸入麻酔のチューブが連続麻酔を持つことが適切な位置にあることを確認してください。 滅菌ドレープ上の動物を仰臥位に置きます。 [内圧解析では、膀胱カテーテルをトンネリングでは、以下のセクションを参照してください。] 下腹部から毛皮を削除するには、シェービングハサミを使用しています。 予備校になると腹部tadineと70％エタノール。 前の切開に、そのようなブプレノルフィン（0.05 mg / kg）のように鎮痛剤は、周術期の疼痛コントロールのために皮下注射することができます。 2。膀胱の切開と露出皮膚を通してメス1〜2センチ（動物のサイズとラットまたはマウスに依存するかどうか）下正中切開を行います。基本的な腸や膀胱を傷つけないように注意しながら直筋切開を介しての下部に切開を深めます。 歯鉗子を使用して、腹直筋を高め、細かいMetzenbaumはさみで筋肉の自由後面を分析。 あなたの皮膚切開の長さ全体のための正中線の筋肉の残りの部分を切開。 切開創傷（ 図1）を介して膀胱を提供します。膀胱は、通常、骨盤の中で最も依存器官である。 （男性では、前立腺は、実際にはもっと依存しており、より大きい解凍された膀胱）。 場所1滞在膀胱の後壁を介して縫合し、別の6から0ポリプロピレン縫合糸を使用して、膀胱の前壁を介して。横方向に追加の縫合糸を配置します。これらの縫合糸を接続しないでください。縫合糸がピンと張った開催されたとき、膀胱は約1cm 2（ 図2）を測定する正方形の設定があります。彼らは容易に膀胱組織を介してプルアップすることができ、これらの縫合であまりにも緊張を持っていないように注意してください。 約1cm（ラット膀胱における1.5〜2センチメートル）の正中線の前膀胱壁（膀胱のドームからわずかに劣る）を介して縦方向に膀胱を切開。 3。足場の吻合細かいハサミを使用して、膀胱の欠陥のおおよその領域に絹の足場をトリミングします。 7から0ポリグラクチン縫合糸を使用して、足場の一角から始まり、連続で膀胱に縫合、実行防水シールの欠陥の周りのすべての方法（ 図3）を作成する方法。 30ゲージの注射針で膀胱の壁を介して浸透させることによって滅菌生理食塩水で膀胱を充填することによって吻合の整合性をテストします。漏れが見つかった場合、これはギャップを埋めるために追加の中断7から0ポリグラクチン縫合糸で閉じることができます。 腹部に戻って再構築さ​​れた膀胱を減らすことができます。 4。切開閉鎖前の腹壁の閉鎖に、（0.25％<3 mg / kg）を局所麻酔のためにbupivicaineと直筋と皮下組織を注入します。 連続的な、実行中の4から0ポリグラクチン縫合糸とReapproximate直筋。 連続的な、実行中の4から0ポリグラクチン縫合糸で皮膚を閉じます。 切開（ 図4）を清掃し、乾燥させます。 麻酔からの覚醒のために暖かく、きれいなケージに動物を転送します。 </oL> 内圧分析のために膀胱カテーテルの留置のための手順は、次のとおりです。 5。膀胱カテーテルをトンネリングシェービングハサミ、歯鉗子、微細な非外傷性ピンセット、細針ドライバ、ガーゼ、Metzenbaumはさみ、腱のはさみ、小型の湾曲したクランプ、メス刃、6-0ポリプロピレン、4〜0：必要な手術器具の滅菌手術野を設定します。ポリグラクチン縫合糸は3-0絹縫合糸（マウスの4から0絹縫合糸）、18G針、22Gブラントチップニードル、25Gニードル、1 mLの生理食塩水を充填シリンジ、ポリエチレンチューブ50（PE-50）〜10の長さをカットCM。 フレア静かに炎にそれを公開することにより、PE-50チューブの端。端から溶けたりルーメン（これは "非フレア"端に接続されている25G針を介して生理食塩水を注入し、流れを確保することによって確認することができます）閉塞しないように注意してください。これは、膀胱（ 図5）内にチューブを維持するためのアンカーとして機能します。 <li>のように、上記のステップ1.2に動物を麻酔。 肩甲骨とventrumに下腹部の間に動物の背側の両方から毛皮を削除するには、シェービングハサミを使用しています。 準備betadineと70％エタノールでエリア。ドレープ上で発生しやすい動物を配置します。 肩甲骨の間の背に約1cmの切開を行います。 Metzenbaumはさみを使用して、平面上にハサミの先端を置き、腹側腹部の周りにトンネルを作成するためにそれらを拡散させることによって皮膚の基礎となる筋肉の間に飛行機を開発しています。 動物の仰臥位の位置を変更します。あなたの腹部の切開を行い、上記の手順2.1から2.4で膀胱を公開します。腹部に戻って膀胱を減らすことができます。 あなたの背部皮膚切開から始めて、ステップ5.6で作成した皮下トンネルに小さなクランプを配置します。腹部にクランプの先端が腹壁を通して腹腔内の内容、ピアスを保護するために、あなたの指を使用します。 sを把握moothクランプ付きPE-50チューブの端部と背側を切開して、それを引き戻す。球根の端が腹壁（ 図6）を超えて引っ張らないことを確認してください。 6。膀胱管を配置切開して膀胱を提供します。この時点から、膀胱損傷や炎症を引き起こす可能性が膀胱に外傷を防ぐために、微細な鉗子で処理されるべきであることスキューあなたの内圧の結果や手術後の動物のために追加の不快感の結果。 膀胱の管のための提案サイトをメモしておきます。それが膀胱のドーム（はAugmentセグメントに優れた）に配置する必要があります。これはチューブのよじれや閉塞を防ぐことができます。 6から0ポリプロピレン縫合糸を使用して、次のように膀胱のドームでpursestringステッチを配置します。場所第一投を長手方向に膀胱の壁を通って、膀胱の管のための提案サイトへの横。縫合が誤ってすべての方法を介して引き出されないように、緩い端に小さなクランプをしておきます。まず第一投の出口に少し外側膀胱壁に入って始めて、横方向に次の投球を置きます。 縫合糸がぴんと引っ張らないでください。ちょうどあなたの最後の、横縫合の出口部位に頭側膀胱に入って（縦に）最初に次の縫合と平行に配置します。第四throwは、最後のステッチと、非常に最初のスローの入り口の隣にある最後の出口側が開始されます。正しく行われ、これは提案されたカテーテル部位（ 図7）円周正方形を形成します。 18G針、pursestring縫合糸の中心に穴を開ける膀胱壁を使用します。 （腔内になるだけで十分）も深く突き刺さるないように注意してください。オープニングで細かい鉗子の先端を置き、そっと穴を広げるために広がった。 の欠陥にカテーテルの球根の端を挿入します。膀胱までは腔内です。カテーテルの周りタイトpursestring縫合糸を引いて、それを縛り付ける。このような場所（ 図8）でそれを維持するカテーテルの周囲に膀胱壁をシンチする必要があります。 縫合糸の一端を取り、一度カテーテルのまわりでそれをラップし、さらにカテーテルを確保するため、これを縛り付ける。 7。カテーテルをテストし、腹部切開を閉じる 1 mLのシリンジと25G針で、チューブに針を挿入し、徐々に膀胱を伸展するために生理食塩水を注入します。カテーテルの周囲に漏れのために観察します。あなたが尿道から漏れ見たら、再び膀胱を解凍するために生理食塩水を吸引除去する。 上記の手順4.1から4.4で腹部切開を閉じます。 8。背側切開を閉じて、カテーテルの保護（ラット用） しやすい動物を移動します。 はさみで皮膚のレベルでカテーテルチューブをカットします。 22G鈍TIを挿入します。チューブにpの針。 実行しているファッションで4から0ポリグラクチンとチューブを介して皮膚を閉じます。皮膚から押し出し針ハブにしておきます。 鈍針で静脈ラインキャップを置きます。 3-0絹縫合糸を使用して、皮膚へのカテーテル先端部（ 図9）を固定します。 切開を清掃します。麻酔からの覚醒のために暖かく、きれいなケージにラットを転送します。 8 *（マウスやラット用）背側切開を閉じて、カテーテルの保護 *それをよじれまたは終了を溶かすために炎を使って、カテーテルの遠位端を閉塞。 *コイルチューブの端と（それを短縮するためにチューブを切断しない）動物の背に皮下の袋に入れたまま（ 図10）。 *実行しているファッションで4から0ポリグラクチン（ 図11）とチューブを介して皮膚を閉じます。 *膀胱内圧測定の日に、betadineと70％エタノールで背側切開を準備。麻酔下で背側切開を開き、皮下の袋から、コイル状のチューブを取り外します。切開を閉じます。麻酔から動物を目覚めさせ、それが完全に目覚めているときに膀胱内圧測定を実行します。 9。代表的な結果 – 外科的方法再構築された膀胱は、重要な尿漏れ（ 図3）に関連する合併症を避けるためにできるだけ防水にする必要があります。腹部切開で震えたり傷ついたりするとかじるように通常のマニフェストの痛みや不快感。これは、メロキシカム（0.5-1.0 mg / kgを皮下投与）などの非ステロイド性抗炎症などの毎日の皮下注射で管理することができます。一般的に、動物は手術後最初の3日間のための注射剤のみを必要とします。これは、そのような必要に応じて、ブプレノルフィン（0.05 mg / kgを皮下すべての8-12時間）として、オピオイドを補充することができます。動物は、最初の3手術後日、TWを毎日3回監視する必要があります術後日3-5とその後の毎日の氷の痛み、感染の兆候は、適切な創傷治癒、アクティビティ、グルーミング、皮膚の膨圧のために評価することが、その後毎日。抗生物質（バイトリル、5mg/kgを皮下0.1 mLを超えないボリューム内のすべての24時間）は感染症に対する外科的予防法としては、最初の72時間、次の手術のために与えられている。正常な回復の兆しが通常の歩行と活動レベルは、適切な摂食、飲料、痛みや苦痛の有無（無発声）とcagematesと通常の社会である。少なくとも5-7日間の回復時間は、膀胱の治癒を可能にするために、内圧分析の前に与えられた、潜在的に結果に影響を与える可能性があり、炎症を減少させるべきである。 内圧の解析 10。目を覚まし内圧の解析セットアップは、データのキャプチャと分析LabChart V6（ADInstruments）と、ハーバード22シリンジポンプ（ハーバードApparaを注入してMLT844 ADInstrumentsで説明TUS、ホリストン、MA）、他の同等のシステムが利用可能であるが（ 図12）。 使用内圧システムの仕様に基づいてボリュームと圧力の両方をキャリブレーションします。 スケールにわたって中断され代謝ケージ（金網の床のケージ）に動物を配置します。スケールは、トランスデューサーに接続されています。 すべての気泡のシステムをパージし、輸液ポンプから連続的な流れを確保します。 コンピュータにデータ·キャプチャ·システムを接続し、データトレーシングのために観察します。それに応じてスケールを調整します。膀胱圧と尿量は連続的に記録されます。 圧力変換器と輸液ポンプにT-チューブを介して接続された27G針で恥骨上カテーテルにアクセスすることができます。マウスの12.5μL/ minで生理食塩水の注入とラットの100μL/分を開始します。 （ボイド続いて膀胱の圧力上昇）、安定化するためにトレース排尿パターンを許可します。これは通常、約を取る約10-20分。 45から120分以上、少なくとも3〜4排尿サイクルの排尿サイクルを記録します。 アーティファクトにつながる合併症のためにトラブルシューティングするためにリアルタイムで手順全体を観察する（すなわち、カテーテルのよじれ、閉塞、等;議論の下を参照）。 注入を停止し、システムからカテーテルを切断し、そのケージに動物を返します。 11。無意識の内圧の解析（無恥骨上カテーテル） ウレタン（1-2グラム/ kg）を腹腔内注射（IP）で動物を麻酔。 上記の手順1.3から2.4で膀胱を公開します。 ステップ9.2のようにシステムをキャリブレーションします。ステップ9.4から9.5のようにシステムを準備します。 膀胱の外側面に圧力変換器と輸液ポンプにT-チューブを介して接続された27G針を挿入します。 45から90分間の排尿サイクルを記録します。 注入を停止し、膀胱から針を除去し、動物を安楽死させる。</ LI> 12。代表的な結果 – 内圧の解析尿流動態トレーシングは、そのようなボイドボリューム、コンプライアンス、ピーク排尿圧、収縮間インターバル、排尿サイクルタイムおよびポストボイド残留ボリュームなどのパラメータを導出するために分析することができます。 膀胱内圧測定は、充填と排尿相に分けることができます。通常の充填段階では、膀胱は膀胱内圧はほとんど変化でいっぱいになる排尿サイクルの一部です。トレースの正常な排尿相は、排尿筋の収縮に対応した膀胱内圧の安定した上昇で構成されています。トレースの排尿段階で到達する最高圧力は、ピーク時の排尿圧と呼ばれます。高いピーク排尿圧は閉塞性の排尿パターン、hypercontractile膀胱またはSPカテーテルのキンクを示唆している可能性があります。コンプライアンスは、ボリューム植え付けドゥリの比率を取得することによって計算することができます。ngの充填相と圧力（コンプライアンス=ΔV/ΔP）の変化。 hypocompliant膀胱は、低圧力で十分な尿のボリュームを収容することができないものである。 intercontraction間隔は、膀胱内圧測定で見られるように、2つの収縮の間の時間を分析することによって計算することができます。短いintercontraction間隔は、過敏性膀胱ことを示唆している。排尿サイクルタイムは、それが全体の充填が完了するフェーズを排尿およびトレースを分析することによって容易に確認できるまでにかかる時間を指します。膀胱内圧測定の終了時に、（PVR）、ポストボイド残留を得ることができます。これは、排尿筋収縮の終了時に恥骨上カテーテルを吸引することによって行われます。これらのパラメータは、膀胱がいっぱいになると空にのように研究者が客観的に膀胱のダイナミクスを研究に役立ちます。 図1腹部切開の写真膀胱と押し出し。 図2膀胱内腔の暴露と膀胱切開。 図3：膀胱壁の上にインプラントの統合。 図4。クローズ切開の写真。 図5 PE-50チューブのフレアエンド。 図6 PE-50背側切開チューブ（カテーテル）。 図7。Pursestring縫合。 図8。膀胱にカテーテルを保護する。 図9：セキュリティで保護されたカテーテルハブ。 図10皮下の袋でコイル状のチューブ。 図11背側切開閉鎖。 図12の例内圧セットアップ。 図13代表的な膀胱内圧測定トレース。