Bewertung von Biomaterialien für Blasenvergrößerung mit Zystometrische Analysen in verschiedenen Tiermodellen

Chirurgische Verfahren 1. Chirurgische Vorbereitung und Anästhesie Stellen Sie die sterilen OP-Bereich mit den notwendigen chirurgischen Instrumente: Rasieren Scheren, Pinzetten mit Zähnen, feine atraumatische Pinzetten, feinen Nadel Fahrer, Gaze, Metzenbaum Schere, Tenotomie Schere, Skalpell, 30-Gauge-Injektionsnadel, gefüllt Kochsalzlösung 1 ml-Spritze, vier 6-0 Polypropylen Nahtmaterial, 7-0 Polyglactin Naht, 4-0 Polyglactin Naht. Betäuben das Tier mit Isofluran beim Einatmen in der Ansaugkammer. Bestätigen Sie vollständige Induktion des Tieres vor der Übertragung auf das OP-Feld. Sicherstellen, dass die Inhalationsnarkose Rohr in geeignete Position, um kontinuierliche Narkose haben ist. Platzieren Sie das Tier in Rückenlage auf dem sterilen Tuch. [Für zystometrischen Analyse siehe Abschnitt unten im Tunnelbau die Zystostomie Katheter.] Verwenden Sie die Rasur Schere, um das Fell aus dem Unterbauch entfernen. Prep mit der Bauch seinTadine und 70% Ethanol. Vor Einschnitt, einem Analgetikum, wie Buprenorphin (0,05-0,1 mg / kg) subkutan für perioperative Schmerzen Kontrolle injiziert werden. 2. Inzision und Freilegung der Blase Machen Sie eine 1-2 cm (je nach Größe des Tieres und ob Ratte oder Maus) untere Medianschnitt mit dem Skalpell durch die Haut. Vertiefen Sie den Einschnitt am unteren Teil des Schnittes durch den M. rectus kümmert sich nicht um die zugrunde liegende Darm oder Blase zu verletzen. Mit Hakenpinzette, heben das Rektusmuskel sezieren und kostenlos die hintere Fläche des Muskels mit feinen Metzenbaum-Schere. Inzision der Rest der Muskel in der Mittellinie für die gesamte Dauer Ihres Hautschnitt. Geben Sie sich die Blase durch die Narben-Wunde (Abbildung 1). Die Blase ist in der Regel die meisten abhängigen Organ im Becken. (Beim Mann ist die Prostata eigentlich mehr abhängig und ist größer als diedekomprimiert Blase.) Legen Sie eine Standnaht durch die hintere Wand der Blase, und dann noch durch die vordere Wand der Blase mit 6-0 Polypropylen Nahtmaterial. Setzen Sie zusätzliche Nähte seitlich. Binden Sie diese Nähte. Wenn die Fäden straff gehalten werden, wird die Blase haben eine quadratische Form mit Abmessungen von ungefähr 1 cm 2 (Abbildung 2). Seien Sie vorsichtig, nicht zu viel Spannung auf diesen Nähte haben, da sie leicht durch die Blase Gewebe gezogen werden. Inzision der Blase in Längsrichtung durch die vordere Blasenwand (unmittelbar unterhalb der Kuppel der Blase) in der Mittellinie etwa 1 cm (1,5-2 cm in der Ratte Blase). 3. Anastomose der Scaffold Mit einer feinen Schere, schneiden Sie die Seide Gerüst auf die ungefähren Bereich der Blase Defekt. Mit 7-0 Polyglactin Naht, die an einer Ecke des Gerüsts zu starten und zu nähen, um die Blase in einer kontinuierlichen, ausgeführtMode zu schaffen eine wasserdichte Abdichtung den ganzen Weg um den Defekt (Abbildung 3). Testen der Integrität der Anastomose durch Füllen der Blase mit steriler Kochsalzlösung durch Einträufeln durch die Wand der Blase mit einer 30-Gauge Kanüle. Wenn ein Leck gefunden wird, kann dies mit einer zusätzlichen Naht unterbrochen 7-0 Polyglactin, um die Lücke zu schließen, geschlossen werden. Reduzieren Sie die rekonstruierten Blase zurück in den Bauch. 4. Incisional Closure Vor der Schließung der Bauchwand, spritzen sie den M. rectus und des subkutanen Gewebes mit Bupivacain zur Lokalanästhesie (<3 mg / kg von 0,25%). Reapproximate der M. rectus mit einem kontinuierlichen, Laufen 4-0 Polyglactin Naht. Schließen Sie die Haut mit einem kontinuierlichen, Laufen 4-0 Polyglactin Naht. Reinigen und trocknen Sie den Schnitt (Abbildung 4). Übertragen Sie das Tier in einen warmen, sauberen Käfig für das Erwachen aus der Narkose. </ol> Die Schritte zum Zystostomie Platzierung des Katheters für zystometrischen Analyse sind wie folgt: 5. Untertunnelung der Zystostomie Katheter Stellen Sie die sterilen OP-Bereich mit den notwendigen chirurgischen Instrumente: Rasieren Scheren, Pinzetten mit Zähnen, feine atraumatische Pinzetten, feinen Nadel Fahrer, Gaze, Metzenbaum Schere, Schere Tenotomie, kleine gebogene Klemme, Skalpell, 6-0 Polypropylen, 4-0 Polyglactin Nahtmaterial, 3-0 Seidenfaden (4-0 Seidenfaden für Mäuse), 18G Nadel, 22G Nadel mit stumpfer Spitze, 25G Nadel, 1 ml Kochsalzlösung gefüllte Spritze, Polyethylen-Schlauch 50 (PE-50) schwenken, um eine Länge von ~ 10 cm. Flare das Ende des PE-50-Schlauch durch leichtes Aussetzen einer Flamme. Achten Sie darauf, um das Ende abzuschmelzen oder zu verschließen, die das Lumen (dies kann durch Injektion von Kochsalzlösung durch eine 25G-Nadel mit dem "nicht-aufgeweiteten" Ende und die Gewährleistung Durchfluss überprüft werden). Dies dient als Anker, um das Rohr innerhalb der Blase (5) zu halten. <li> Anesthetize das Tier, wie oben in Schritt 1.2. Verwenden Sie die Rasur Schere, um das Fell sowohl aus dem Rücken des Tieres zwischen den Schulterblättern und den unteren Bauch auf der Ventralfläche zu entfernen. Prep die Bereiche mit Betadin und 70% Ethanol. Platzieren Sie das Tier in Bauchlage auf dem Tuch. Machen Sie einen Schnitt 1 cm auf dem Rücken zwischen den Schulterblättern. Mit dem Metzenbaum-Schere, entwickeln eine Ebene zwischen der Haut und der darunter liegenden Muskeln, indem man die Spitzen der Schere in der Ebene und breitet sie einen Tunnel rund um den ventralen Bauch zu schaffen. Positionieren Sie das Tier in Rückenlage. Machen Sie Ihren Bauchschnitt und entlarven die Blase, wie oben in Schritten von 2,1 bis 2,4. Reduzieren Sie die Blase zurück in den Bauch. Geben Sie eine kleine Klammer in Ihre subkutanen Tunnel in Schritt 5,6 ab Ihrem dorsalen Hautschnitt angelegt. Benutzen Sie Ihre Finger, um die intra-abdominale Inhalte, Pierce durch die Bauchdecke mit den Spitzen der Klammer in den Bauch zu schützen. Fassen Sie die smooth Ende des PE-50-Schlauch mit der Klemme und ziehen es durch die Dorsalschnitt. Sicherstellen, dass die bulbed Ende nicht an der Bauchwand (6) gezogen wird. 6. Platzieren des Zystostomieröhrchen Geben Sie sich die Blase durch den Schnitt. Von diesem Punkt sollte die Blase mit einer feinen Pinzette behandelt werden, um Verletzungen der Blase, die Beschädigung oder Entzündung verursachen könnte, die verhindern kann zur Folge haben Ihre Ergebnisse zystometrischen bzw. mit zusätzlichen Unannehmlichkeiten für den tierischen nach der Operation. Notieren Sie sich die vorgeschlagene Standort für die Zystostomieröhrchen. Es sei an der Kuppel der Blase (überlegen zu der Augmentation Segment) abgegeben werden. Dadurch wird verhindert, Knicken oder Okklusion des Rohres. Mit dem 6-0 Polypropylen Nahtmaterial, platzieren Sie einen Tabaksbeutelnähte Stich an der Kuppel der Blase in der folgenden Weise: statt den ersten Wurf durch die Wand der Blase längs, quer zu dem vorgeschlagenen Standort für die Zystostomieröhrchen. Lassen Sie eine kleine Klammer am losen Ende, so dass die Naht nicht versehentlich herausgezogen den ganzen Weg durch. Legen Sie die nächste Wurf in einer Querrichtung, beginnend gehen zuerst in die Blasenwand leicht lateral der Ausfahrt von Ihrem ersten Wurf. Ziehen Sie nicht die Naht stramm. Zeigen Sie mit der nächsten Naht parallel zu Ihrem ersten (längs) gehen in die Blase, nur um der Austrittsstelle des letzten, queren Naht kranial. Der vierte Wurf beginnt lateral der Ausgang der letzten Masche und am Ende neben dem Eingang für Ihren ersten Wurf. Bei korrekter Ausführung bildet dieser eine umlaufende Quadrat um den vorgeschlagenen Standort Katheter (Abbildung 7). Verwendung einer 18G Nadel, die Blasenwand durchbohren in der Mitte des Tabaksbeutelnaht. Seien Sie vorsichtig, nicht zu tief zu durchdringen (gerade genug, um sein intraluminale). Legen Sie die Spitzen der feinen Pinzette in die Öffnung und sanft verteilen, um das Loch zu erweitern. Legen Sie die bulbed Ende des Katheters in den Defekt in derBlase, bis es intraluminalen. Ziehen Sie die Tabaksbeutelnaht fest um den Katheter und binden Sie es nach unten. Dies sollte Cinch die Blasenwand um den Katheter halten es an Ort und Stelle (Abbildung 8). Nehmen Sie ein Ende des Fadens und wickeln Sie es um den Katheter wieder und binden diese bis auf weiteres sichern den Katheter. 7. Testen Sie den Katheter und Schließen der Bauchwunde Mit einer 1 ml Spritze und Nadel 25G, führen Sie die Nadel in den Schlauch und langsam injizieren Kochsalzlösung, um die Blase zu dehnen. Beachten Sie für undichte um den Katheter. Sobald Sie aus der Harnröhre austritt sehen, absaugen Kochsalzlösung, um die Blase wieder zu entpacken. Schließen Sie den Bauchschnitt wie oben in Schritten von 4,1 bis 4,4. 8. Das Schließen der dorsale Inzision und Befestigen des Katheters (für Ratten) Positionieren Sie das Tier anfällig. Schneiden Sie die Katheter-Schläuche auf der Ebene der Haut mit der Schere. Setzen Sie einen stumpfen 22G tip Nadel in den Schlauch. Schließen die Haut über dem Schlauch mit 4-0 Polyglactin in einer Weise ausgeführt. Lassen Sie die Nadelnabe Extrudieren von der Haut. Platzieren Sie eine intravenöse Leitung Kappe auf dem stumpfen Nadel. Mit 3-0 Seidenfaden, sichern Sie die Katheterspitze an der Haut (Abbildung 9). Reinigen Sie den Einschnitt. Übertragen Sie die Ratte in einen warmen, sauberen Käfig für das Erwachen aus der Narkose. 8. * Schließen der dorsale Inzision und Befestigen des Katheters (Für Mäuse oder Ratten) * Verschließen die distalen Ende des Katheters durch Knicken oder es mit einer Flamme, um das Ende zu schmelzen. * Wickeln Sie das Ende des Schlauches und lassen Sie ihn in der subkutanen Tasche auf dem Rücken des Tieres (nicht abschneiden Schlauch um ihn zu kürzen) (Abbildung 10). * Schließen Sie die Haut über den Schlauch mit 4-0 Polyglactin in einem laufenden Mode (Abbildung 11). * Am Tag der Zystometrie, bereiten Sie die dorsale Inzision mit Betadine und 70% Ethanol. Öffnen Sie die dorsale Inzision unter Narkose und entfernen Sie die Coiled Tubing aus dem subkutanen Beutel. Schließen Sie den Einschnitt. Wecken Sie das Tier aus der Narkose und führen Zystometrie, wenn es ganz wach ist. 9. Repräsentative Ergebnisse – Chirurgische Verfahren Das rekonstruierte Blase sollte so wasserdicht wie möglich zu Komplikationen im Zusammenhang mit einer signifikanten Urin Leck (3) zu vermeiden. Schmerzen oder Beschwerden in der Regel manifestieren sich als Zittern oder Kratzen und Nagen an der Bauchschnitt. Dies kann mit tägliche subkutane Injektionen von einem nicht-steroidalen entzündungshemmenden wie Meloxicam (0,5-1,0 mg / kg subkutan) verwaltet werden. Typischerweise werden die Tiere nur mit den Injektionen für die ersten 3 Tage nach der Operation. Dies kann mit einem Opioid, wie Buprenorphin (0,05-0,1 mg / kg subkutane alle 8-12 Stunden), wie Bedarf ergänzt werden. Die Tiere sollten 3-mal täglich überwacht werden für die ersten 3 Tage nach der Operation, TWEis täglich zur postoperativen Tagen 3-5 und dann danach täglich bis zum Schmerz, Anzeichen einer Infektion, adäquate Wundheilung, Aktivität, Pflegen und Hautturgor bewerten. Antibiotika (Baytril, 5mg/kg subkutan alle 24 Stunden in einem Volumen von nicht mehr als 0,1 ml) werden für die ersten 72 Stunden nach der Operation gegeben, wie chirurgische Prophylaxe gegen Infektionen. Zeichen der Erholung sind normal normale Gehfähigkeit und Aktivität, geeignete Fress-und Trinkverhalten, das Fehlen von Schmerzen oder Leiden (keine Vokalisation) und normale Sozialisation mit cagemates. Eine Erholungszeit von mindestens 5-7 Tage sollten vor zystometrischen Analyse gegeben werden, um Heilung zu ermöglichen und Blase verringert Entzündung, die möglichen Auswirkungen auf die Ergebnisse. Zystometrische Analysen 10. Awake Zystometrische Analyse Setup mit MLT844 ADInstruments mit Datenerfassung und-auswertung mit LabChart v6 (ADInstruments) und Infusion mit einer 22 Harvard Spritzenpumpe (Harvard Appara beschriebentus, Holliston, MA), obwohl auch andere vergleichbare Systeme verfügbar sind (Abbildung 12). Kalibrieren sowohl Volumen und Druck auf der Grundlage der Spezifikationen des zystometrischen verwendet. Legen Sie die Tiere in metabolischen Käfigen (Käfige mit einem Drahtgeflecht Stock), die sich über einer Skala suspendiert sind. Die Waage ist mit einem Wandler verbunden. Spülen Sie das System von Luftblasen und sorgen für kontinuierlichen Fluss von der Infusionspumpe. Verbinden Sie den Daten-Capture-System an einen Computer und beobachten, für die Daten-Aufzeichnungen. Passen Sie die Skalierung entsprechend. Blasendruck und Urinvolumen wird kontinuierlich aufgezeichnet werden. Zugriff auf die suprapubische Katheter mit einer 27G-Nadel über ein T-Rohr mit dem Druckwandler und der Infusionspumpe. Beginnen Sie die Infusion von physiologischer Kochsalzlösung bei 12,5 ul / min für die Maus und 100 &mgr; l / min für die Ratte. Lassen Sie das Muster für ungültig erklären Tracing zu stabilisieren (Blase Druckanstieg, gefolgt von einer Leere). Dies dauert in der Regel Angleirund 10-20 Minuten. Notieren Sie die Miktionszyklen für 45-120 Minuten oder mindestens 3-4 Zyklen Blasenentleerung. Beachten gesamte Verfahren in Echtzeit, um Komplikationen, die zu Artefakten (zB Katheter Knicken, Verstopfung, usw.; siehe unten diskutiert) führen wird, zu beheben. Stoppen Sie die Infusion, ziehen Sie den Katheter aus dem System, und senden Sie das Tier in seinen Käfig. 11. Unbewusste Zystometrische Analysis (Kein suprapubischen Katheter) Anesthetize das Tier mit Urethan (1-2 g / kg) intraperitoneal (ip) Injektion. Setzen Sie die Blase, wie oben in Schritten von 1,3 bis 2,4. Kalibrieren des Systems, wie in Schritt 9.2. Bereiten Sie das System wie in Schritt 9,4 bis 9,5. Legen Sie eine 27G-Nadel über ein T-Rohr mit dem Druckaufnehmer und Infusionspumpe in der lateralen Seite der Blase verbunden. Notieren Sie die Miktionszyklen für 45-90 Minuten. Stoppen Sie die Infusion, entfernen Sie die Nadel aus der Blase und das Tier einschläfern. </ Li> 12. Repräsentative Ergebnisse – Zystometrische Analysen Urodynamische Kurven können dann analysiert, um daraus Parameter wie nichtig Bände, Compliance, Peak Entleerungsdruck unter Kontraktion Intervall, Miktion Zykluszeit und Post nichtig Restvolumen werden. Cystometrogram kann in einer Füllung und einer Entleerung Phase unterteilt werden. Ein normaler Befüllung Phase ist der Teil des Miktionszyklus in dem Blase füllt mit sehr geringer Änderung des intravesikalen Druck. Eine normale Entleerung Phase der Verfolgung besteht aus einem stetigen Anstieg der intravesikale Druck entsprechend dem Detrusorkontraktion. Der höchste Druck während der Phase der Entleerung Tracing erreicht den Gipfel Entleerung Druck bezeichnet. Ein hoher Spitzenleistung Entleerung Druck könnte vermuten lassen, eine obstruktive Miktion Muster, ein hypercontractile Blase oder ein Knick in der SP-Katheter. Die Einhaltung kann durch den Erwerb des Verhältnis des Volumens instillierte Duri berechnet werdenng der Füllphase und die Veränderung des Drucks (Compliance = AV / AP). Ein hypocompliant Blase ist eine, die nicht in der Lage, angemessene Mengen Urin bei niedrigen Drücken unterzubringen ist. Die intercontraction Intervall kann durch Analysieren der Zeit zwischen zwei Kontraktionen auf der cystometrogram gesehen berechnet werden. Ein kurzes Intervall intercontraction deutet auf eine Reizblase. Die Miktion Zykluszeit bezieht sich auf die Zeit, die für eine gesamte Befüllung und Entleerung Phase zu vollenden und kann leicht ermittelt durch die Analyse der Ablaufverfolgung. Am Ende des Zystometrie, kann nach Blasenentleerung Rest (PVR) erhalten werden. Dies wird durch Ansaugen des Suprapubische nach dem Abschluss einer Detrusorkontraktion durchgeführt. Diese Parameter helfen der Prüfer objektiv untersuchen die Blase Dynamik als die Blase füllt und leert. Abbildung 1. Foto des Bauchschnittund Extrusion der Blase. Abbildung 2. Blasen-Schnitt mit der Exposition der Blase Lumen. Abbildung 3. Integration des Implantats in die Blasenwand. Abbildung 4. Foto des geschlossenen Schnitt. Bild 5. Aufgeweitete Ende des PE-50-Schlauch. 6. PE-50-Schlauch (Katheter) durch die Dorsalschnitt. Abbildung 7.Tabaksbeutelnaht. 8. Befestigen des Katheters in die Blase. Abbildung 9. Secured Katheteransatz. Abbildung 10. Coiled-Schlauch in subkutane Tasche. Abbildung 11. Dorsal incisional Schließung. Abbildung 12. Beispiel zystometrischen Set-up. Abbildung 13. Vertreter Zystometrie Tracing.