Развитию облитерирующего бронхиолит в мышиной модели ортотопической трансплантации легких

1. Донор процедура Все хирургические процедуры выполняются с использованием стерильной техники. Нет антибиотики даются донора и реципиента мышей. Индукция анестезии доноров мыши начинается с 5% Изофлюран. Мышь orotracheally интубированных с 20 калибра внутривенный катетер, а затем помещают на грызунах вентилятора, с использованием 100% кислорода в размере 125 вдохов / мин и примерно 0,5 мл дыхательного объема (2% от массы тела). Анестезия поддерживается с вдыхаемым 1-2% Изофлюран. Донорами мышь находится в лежачем положении, нацелен на 70% спирте. Laparosternotomy выполнена в виде комбинированной линии и поперечный разрез. Гепарин 100 ЕД / кг вводят в нижнюю полую вену (НПВ), с чуть ниже печени. Диафрагму разрезают вдоль брюшной реберной привязанность к позвоночнику и грудной полости подвергается, сокращая обе стороны грудистены на шее. После надрезание IVC на уровне диафрагмы, в правом предсердии придаток режется и легкие промыть 2 мл охлажденной (4 ° С), лактата Рингера впрыском и 0,1 мл гепарина через поперечный разрез в корне легочной артерии ( PA) ствола. Арест вентиляции на две трети в конце выдоха инфляции, сердца и легких блоков вырезали и хранили на льду (4 ° С). Легких донора левой готовится к получателю крепления манжеты. Легочной связки вырезается до легочных вен (PV). Рубчик выносится на удаление пищевода и аорты. Определить ПА, расположенной на самой черепной аспект воротах, а также прилагаемые главного бронха (Br). Тщательно анализировать ПА из бронхов. PA манжета из 24 калибра внутривенное (IV) катетер и сократить до 0,5 мм в длину с расширением 0,7 мм. Вся поверхность манжеты затем прошлифовать для облегчения anastoMOSIS. Манжета для бронхов происходит от 20 калибра катетер, и нарезать длиной 1,0 мм с расширением 0,7 мм. Используя те же материалы, манжеты PV меняется в зависимости от веса донора мыши. В частности, для мышей 24-27 граммов манжеты размер составляет 22 калибра 0,7 мм в длину 0,7 мм расширением. Для мышей весом 27-32 грамм, исследования использовали 20 калибра катетер, который составляет 0,7 мм в длину 0,7 мм расширением. Манжеты вставляются в дистальных концов ПА, ПВ и Br и закрепляется 9-0 шва. Донор легких покраснел и промывают стерильным физиологическим раствором с гепарином стерильной перед хранением. Донор легких затем обматывают стерильной марлей, смоченной в стерильном физиологическом растворе на льду (4 ° С), который держит легких очень чисто и стерильно. Зажим микрососудов находится на бронхи, чтобы предотвратить вступление лактата Рингера в дыхательные пути. 2. Получатель процедур Индукция ANESанестезии и искусственной вентиляции легких такие же, как описано выше доноров. Левая стена грудь побрился и нацелен на 70% спирте и хирургического поля задрапированы. Торакотомия разрез в левой третьего межреберья, расширяя разрез сверху близко к позвоночнику, и микрососудов зажим Расположенные слева легочных сосудов и бронхов, прилегающих к сердцу. Вы можете видеть, PA в черепной аспект, PV на хвостовом конце воротах и ​​Br между ними. Использование нежной тяги на кровоостанавливающего, чтобы вызвать легкое напряжение на ПА, Br и PV, левого легкого вырывается из грудной полости, оставляя центральных структур грудной зажаты. ПА, ПВ и Br изолированы от тупой диссекции следует поместить 9-0 шов расположен свободно вокруг ПА, ПС и Br. После вскрытия ПА полностью от адвентиции влагалища, небольшой поперечный разрез приблизительно 1/4 окружности судна являетсясделано в передней стенке, в результате чего продолжение спинной части артерии нетронутыми. Донор легких, завернутый в холод, лактата Рингера пропитанной хлопковой марли и получали, как описано выше, то положение в грудной полости, и манжет вставлена ​​получателя ПА, ПВ и Br и закрепляется 9-0 шва. Грудной зажим крест удален позволяет реперфузии и вентиляции. После размещения трансплантированных легких обратно в получатель грудной клетки, торакотомия разрез закрыт с помощью 5-0 шва. Мышь имеет право взыскать с анестезией. Бупренорфин (0,05-0,15 мг / кг) вводят сразу после операции, и каждые 8 ​​часов в течение 2-3 дней после операции. 3. Представитель Результаты Наш опыт учит нас, что он требует нескольких месяцев повторяют практику, чтобы стать специалистами в пересадке легкого модель мыши. После того, как знание достигается, мыchieved 96% (96/100 последовательных операций) периоперационной выживаемость при смерти, происходящих в течение семи дней после операции. Две смерти были связаны с кровотечением, которое началось во время операции, и pneumothraces были причиной смерти в двух других мышей. Для всех процедур, теплое время ишемии 14,32 ± 3,14 минут, а холодное время ишемии 58,51 ± 18,06 минут. Три группы ортотопической трансплантации легких изучали: isograft: C57BL / 6 → C57BL / 6, аллотрансплантата: C57BL/10 → C57BL / 6 и C57BL / 6 → C57BL/10. Мы использовали только самцов мышей, но наш метод может быть также применен к самкам мышей, потому что нет никаких существенных анатомических различий между полами. Классификация отказа патология была проведена в слепым методом с использованием стандартных критериев для клинической трансплантации легких 7 (табл. 1). В то время как наблюдается легкая или не отказ в isograft (C57BL / 6 → C57BL / 6), как аллотрансплантат комбинации разработанных компаниямиРабле острого или хронического отторжения (рис. 1). В отличие от ОВ достоверно чаще в C57BL/10 → C57BL / 6, чем C57BL / 6 → C57BL/10 группы day28 (табл. 1). C57BL / 6 → C57BL / 6 C57BL/10 → C57BL / 6 C57BL / 6 → C57BL/10 P-значение Отказ патологии "А" Счет на 28-й день 0,67 ± 0,89 * 3,33 ± 0,82 * 3,29 ± 0,76 * Р> 0,05 OB / Всего мышей в день 21 и 28 0/24 (0%) ** 14/34 (42,1%) ** 2/16 (12,5%) ** P <0.05 Таблица 1. Гистологическое оценки острого отторжения и распространение облитерирующего бронхиолита после пересадки. Скоринг острого отторжения ("A" результаты) с помощью стандартных критерияteria, как описано в представительные результаты. Данных представляет собой среднее ± стандартное отклонение "А" результаты на дней 28 после трансплантации. Данные представляют количество и процент мышей в каждой группе, которая разработала Б. в дни 21 и 28 после трансплантации. Рисунок 1. Макроскопические выводы и гистопатология через 28 дней после трансплантации легких. Группа 1А представляет макроскопических выводы и H & E окрашенных легких Isograft и право наивно легких. 1В и 1С группа представляет собой H & E и трехцветного окрашенных Массона BL/10 легких аллотрансплантата пересаживают в BL / 6 мышей получателя, который разработал О. и не О.Б., соответственно. Белая стрелка указывает 1B поражений ОВ. Группа 1D показывает BL / 6 легких аллотрансплантата пересаживают в BL/10 мыши получателя. Главная устранения неисправностей во время процедуры были следующими. Кровоток расстройства: Флеш легких донора доцвет становится белого цвета. Использование избыточного давления может вызвать отек легких. Но не давите слишком сильно, чтобы предотвратить отек после пересадки. Сложность манжеты вставки в доноры: Удостоверьтесь, что сосудистая имеет достаточную длину и бесплатно прилагается жира и соединительной ткани. Кровотечение на месте анастомоза: Используйте Q советы, чтобы оказать давление на пораженный участок в течение приблизительно 5 минут. Получатель ПА кровоток препятствия: в основном вызвано кручение в манжете вставки. Если воздух наблюдается в ПА повторно делать анастомоза необходимо. Трудно анастомоза PV: PV Мембрана очень тонкая и легко слез. Выберите нужный размер манжеты и вставить прямо в PV получателя очень мягко. Получатель PV кровотока препятствие: Убедитесь, что положение и направление манжеты. Отпустите сжатия от бронхиальной манжеты. Пневмоторакс: Это может быть вызвано либо бронхиальной перфорации из-за manipulatioп дыхательных путей, или перфорация поверхности легких из-за травмы связаны с процедуры трансплантации. В первом случае лечение с хирургическим закрытием отверстия в стене дыхательных путей, а это последнее трактуется oversewing утечки на поверхность с помощью легких 10-0 нейлона шва.