Entwicklung einer Bronchiolitis obliterans in einem Mausmodell der orthotopen Lungentransplantation

1. Donor Vorgehensweise Alle chirurgischen Eingriffe wurden durchgeführt unter Verwendung steriler Technik. Keine Antibiotika sind Spender und Empfänger Mäuse gegeben. Die Induktion der Anästhesie der Donor-Maus wird mit 5% Isofluran eingeleitet. Die Maus wird orotracheal mit einer 20-Gauge-intravenösen Katheter intubiert und dann auf einem Nagetier Beatmungsgerät angebracht, wobei 100% Sauerstoff bei einer Rate von 125 Atemzüge / Minute und etwa 0,5 ml Atemzugvolumen (2% ihres Körpergewichts). Die Narkose wird mit inhalativen 1-2% Isofluran aufrechterhalten. Der Spender Maus in Rückenlage gebracht wird, präpariert mit 70% Alkohol. Laparosternotomy ist als kombiniertes Mittellinie und quere Inzision durchgeführt. Heparin bei 100 U / kg in die Vena cava inferior (IVC) injiziert, von unmittelbar unter der Leber. Die Membran ist auf der ventralen Rippen Anlage gegen die Wirbelsäule geschnitten und die Brusthöhle durch Schneiden auf beiden Seiten der Brust ausgesetztWand bis zum Hals. Nach dem Einschneiden der IVC auf der Ebene der Membran wird die rechte Herzohr geschnitten und die Lunge gespült mit 2 ml gekühltem (4 ° C) Ringer-Lactat-Einspritzung und 0,1 ml Heparin über eine quere Inzision an der Wurzel der Lungenarterie ( PA) Kofferraum. Verhaftung Belüftung bei zwei Drittel der endexspiratorischen Inflation wird die Herz-Lungen-Block herausgeschnitten und auf Eis gelagert (4 ° C). Der Spender linke Lunge ist für den Empfänger durch die Anbringung von Manschetten hergestellt. Das Lig. pulmonale wird bis zu der Lungenvene (PV) eingeschnitten. Der Hilus wird durch das Entfernen der Speiseröhre und der Aorta gebracht. Identifizieren Sie die PA, am meisten kranial des Hilus befindet, sowie die angeschlossenen Hauptbronchus (Br). Sorgfältig sezieren die PA aus den Bronchien. PA Manschette wird von einer 24-Gauge intravenöse (IV)-Katheter gemacht und geschnitten, um 0,5 mm in der Länge mit einer Ausdehnung von 0,7 mm. Die gesamte Oberfläche der Manschette wird dann abgeschliffen, um Anastomose zu erleichternMOSIS. Die Manschette für den Bronchus von einer 20-Gauge-IV-Katheter abgeleitet und geschnitten in der Länge von 1,0 mm mit einer Ausdehnung von 0,7 mm. Unter Verwendung der gleichen Materialien, variiert die PV Manschette mit dem Gewicht der Donor-Maus. Speziell für Mäuse von 24 bis 27 Gramm der Manschette ist 22-Gauge-, 0,7 mm in der Länge mit einer 0,7 mm-Erweiterung. Bei Mäusen mit einem Gewicht von 27-32 Gramm, verwendet die Studien eine 20-Gauge-Katheter, 0,7 mm in der Länge mit einer 0,7 mm-Erweiterung ist. Die Manschetten sind in den distalen Enden der PA, PV-und Br eingesteckt und mit einem 9-0 Faden. Der Spender Lunge gespült und gewaschen mit steriler Kochsalzlösung mit steriler Heparin vor der Lagerung. Der Spender Lunge wird dann mit steriler Gaze in steriler Kochsalzlösung getränkt auf Eis (4 ° C), die die Lunge sehr sauber und steril hält gewickelt. Ein Mikrogefäßzellen Klemme an den Bronchus in der Lage, Ringer-Lactat-Eintrag in die Luftröhre zu verhindern. 2. Empfänger Vorgehensweise Die Induktion von AnesAnästhesie und Beatmung sind die gleichen wie für den Spender oben beschrieben. Die linke Brustwand wird rasiert und desinfiziert mit 70% Alkohol und das OP-Feld wird drapiert. Eine Thorakotomie Einschnitt wird in der linken dritten Interkostalraum vorgenommen, die sich dorsal den Einschnitt in der Nähe der Wirbelsäule und eine Mikrogefäßzellen Klammer auf der linken Lungengefäße und Bronchien neben dem Herzen platziert. Sie können PA am kranialen Aspekt sehen, PV am kaudalen Ende des Hilus und Br zwischen ihnen. Mit leichten Zug auf die Gefäßklemme zu milde Spannung auf der PA-, Br und PV zu verursachen, wird die linke Lunge aus der Brusthöhle gezogen, während wobei die zentralen Hilusgebilde eingespannt. Die PA, PV-und Br werden durch stumpfe Dissektion, indem Sie einen 9-0 Faden locker um den PA, PV-und Br positioniert gefolgt isoliert. Nach der Zerlegung des PA völlig von seiner Adventitia Mantel, einem kleinen queren Schnitt von etwa einem Viertel des Umfangs des Schiffes istgemacht in die vordere Wand, so dass die Fortsetzung der dorsale Teil der Arterie intakt. Der Spender Lunge, in der Kälte, Ringer-Lactat-Watte Gaze gehüllt und wie oben beschrieben hergestellt, wird dann in die Brusthöhle positioniert ist, und Manschetten in den Empfänger PA, PV und Br eingesetzt und mit 9-0 Nahtmaterial. Der Hilus Kreuzklemme ist abnehmbar, was für die Reperfusion und Lüftung. Nach der Positionierung der transplantierten Lunge zurück in den Empfänger Thorax wird die Thorakotomie Einschnitt verschlossen mit einem 5-0 Faden. Die Maus ist berechtigt, von der Narkose erholen. Buprenorphin (0,05-0,15 mg / kg) wird unmittelbar nach der Operation verabreicht, und für alle 8 Stunden für 2-3 Tage nach der Operation. 3. Repräsentative Ergebnisse Unsere Erfahrung hat uns gelehrt, dass es mehrere Monate wiederholte Praxis, sich in der Maus-Lungen-Transplantation Modell beherrschen erfordert. Nach dem Kenntnisstand erreicht ist, wir einchieved einen 96% (96/100 aufeinander folgenden Operationen) perioperative Überlebensrate mit Eintritt des Todes innerhalb sieben Tage nach der Operation. Zwei Todesfälle waren auf Blutungen, die intraoperativ begonnen, und pneumothraces waren die Ursache des Todes in den beiden anderen Mäusen. Für alle Verfahren, war die warme Ischämiezeit 14,32 ± 3,14 Minuten, und kalte Ischämiezeit betrug 58,51 ± 18,06 Minuten. Drei orthotopen Lungentransplantation Gruppen untersucht: Isograft: C57BL / 6 → C57BL / 6, Allotransplantat: C57BL/10 → C57BL / 6 und C57BL / 6 → C57BL/10. Wir haben nur männliche Mäuse, aber unsere Technik kann auch für weibliche Mäuse aufgetragen werden, weil es keine signifikanten anatomischen Unterschiede zwischen den Geschlechtern. Grading der Ablehnung Pathologie wurde verblindet Verwendung von Standard-Kriterien für die klinische Lungentransplantation 7 (Tabelle 1) durchgeführt. Während wir milde oder gar keine Ablehnung beobachtet in Isograft (C57BL / 6 → C57BL / 6), beide Allograft-Kombinationen Unternehmen entwickeltrable akute oder chronische Abstoßung (1). Im Gegensatz dazu war OB signifikant häufiger in der C57BL/10 → C57BL / 6 als C57BL / 6 → C57BL/10 Gruppe von day28 (Tabelle 1). C57BL / 6 → C57BL / 6 C57BL/10 → C57BL / 6 C57BL / 6 → C57BL/10 P-Wert Die Ablehnung Pathologie "A"-Scores an Tag 28 0,67 ± 0,89 * 3,33 ± 0,82 * 3,29 ± 0,76 * P <0,05 OB / Total Mäusen am Tag 21 und 28 0/24 (0%) ** 14/34 (42,1%) ** 16.2 (12.5%) ** P <0,05 Tabelle 1. Histologischen Werte der akuten Abstoßung und Prävalenz der Bronchiolitis obliterans nach der Transplantation. Scoring der akuten Abstoßung ("A" Scores) von Standard-CRIterien wie beschrieben in repräsentative Ergebnisse. Daten stellt den Mittelwert ± Standardabweichung von "A"-Scores bei Tage 28 nach der Transplantation. Daten stellt die Menge und den Prozentsatz der Mäuse in jeder Gruppe, OB an den Tagen 21 und 28 nach der Transplantation entwickelt. Abbildung 1. Makroskopischen Befunden und Histopathologie bei 28 Tage nach der Lungentransplantation. Einlage 1A stellen makroskopisch und H & E gefärbten Isograft Lunge und der rechten Lunge naiv. Systemsteuerung 1B und 1C für H & E und Masson-Trichrom gefärbten BL/10 Lunge Allotransplantat in BL / 6 Mäuse Empfänger, der OB und nicht OB entwickelt, jeweils transplantiert. Der weiße Pfeil in 1B identifiziert Läsionen der OB. Panel-1D zeigt BL / 6 Lunge Allograft in BL/10 Maus Empfänger transplantiert. Haupt Fehlersuche während des Verfahrens waren wie folgt. Der Blutfluss Störung: Flush Spenderlunge bisdie Farbe wird in der Farbe weiß. Verwendung von zu hohem Druck könnte induzieren Lungenödem. Aber nicht zu viel Push-to-Ödem nach der Transplantation zu verhindern. Die Schwierigkeit der Manschette Einsetzen in den Spender: Gefäßsystem zu vergewissern, dass eine ausreichende Länge und kostenlos beiliegenden Fett-und Bindegewebe ist. Blutungen an Anastomosenstelle: Mit Q-Tipps, um den Druck auf betroffene Stelle für etwa 5 Minuten anwenden. Empfänger PA Obstruktion des Blutflusses: Hauptsächlich durch Torsion der Manschette während der Insertion verursacht. Wenn Luft in der PA beobachtet wird dann neu zu machen der Anastomose erforderlich ist. Schwierige PV-Anastomose: Membran der PV ist sehr dünn und leicht Tränen. Wählen Sie geeignete Manschettengröße und stecken gerade an den Empfänger der PV sehr sanft. Empfänger PV Obstruktion des Blutflusses: Achten Sie darauf, die Position und Richtung der Manschette. Lassen Sie den Druck aus dem Bronchialsystem Manschette. Pneumothorax: Dies kann entweder durch Perforation bronchiale aufgrund manipulatio verursacht werdenn der Atemwege oder Perforation des Lungen Oberflächenbereichs durch Trauma mit dem Transplantat Verfahren verbunden sind. Ersteres wird mit chirurgischer Verschluss des Loches in der Wand der Atemwege behandelt, und das letztere wird durch Übernähung das Leck auf der Oberfläche der Lunge mit 10-0 Nylonfaden behandelt.