Ixodes scapularis Keneler gelen tükürük, Tükürük Bezi ve hemolimf Koleksiyonu
Summary
Keneler hemolimf, tükrük bezleri ve tükürük toplama patojenler hastalıklara nasıl neden kene kaynaklı incelemek önemlidir. Bu protokolü biz beslenmesini hemolimf ve tükrük bezleri toplamak nasıl gösterilmektedir<em> Scapularis Ixodes</em> Periler. Ayrıca kadın tükürük toplama göstermek<em> I. scapularis</em> Yetişkinler.
Abstract
Keneler dünya çapında bulunur ve birçok kene kaynaklı hastalıklar insanlarda eziyet edilir. Keneler, Lyme hastalığı ve kene kaynaklı tekrarlayan ateş (Borrelia spp.), Rocky Mountain Benekli Ateşi (Rickettsia rickettsii), Ehrlichiosis (Ehrlichia chaffeensis ve E. equi), anaplazmoz (Anaplasma phagocytophilum), ansefalit (kene neden patojenler için vektörleri kaynaklı ensefalit virüsü), babesiosis (Babesia spp.), Kolorado kene ateşi (Coltivirus) ve tularemi (Francisella tularensis) 1-8. Düzgün konak içine aktarılacak bu enfeksiyon ajanları farklı şekilde, gen ekspresyonu düzenleyen kene proteinleri ile etkileşim ve kene 3,9-13 yoluyla göç ederler. Örneğin, Lyme hastalığı ajanı, Borrelia burgdorferi, kenenin enzootik döngüsü 14,15 şölen ve kıtlık aşamalarına farklı gen ifade aracılığıyla uyarlar. Dahası, bir Ixodes kene gibi bir tüketirbloodmeal Borrelia çoğaltmak ve ortabağırsak gelen onlar tükürük bezlerinin seyahat ve sınırdışı tükürük 9,16-19 ile ev sahibi içine iletilir hemocoel, göç.
Kene beslenirken ev sahibi genellikle güçlü bir hemostatik ve immün yanıtı 11,13,20-22 ile yanıt verir. Bu konak yanıtları rağmen, I. kene tükürük 3,11,20,21,23 besleyen kene yardım immünomodülatör olan proteinlerin parçalayıcı ajanlar, antikoagülanlar ve fibrinolysins içerdiğinden scapularis birkaç gün süreyle besleyebilir. Kene tükürük veya tükürük bezi ekstraktı (SGE) tarafından sahip immünomodülatör faaliyetleri çok sayıda kene kaynaklı patojenlerin 3,20,24-27 iletimi, çoğalması ve yayılması kolaylaştırmak. Daha da kenelerin beslenme aktif incelemek ve kene tükürük toplamak esastır enfeksiyöz ajanlar hastalığı nasıl neden kene kaynaklı anlamak için. Bu video protokol için diseksiyon teknikleri gösteriyorhemolimf toplanması ve aktif I. beslenmesini tükürük bezlerinin çıkarılması scapularis periler 48 sonra ve 72 saat sonrası fare yerleşimi. Ayrıca yetişkin bir dişi I. tükürük toplama göstermek scapularis kene.
Protocol
Discussion
Kene hemolimf, tükrük bezleri ve tükürük toplama kene kaynaklı patojen bulaşma çalışmada önemlidir, yaygınlık, yaygınlaştırma, proliferasyon ve kene ve ana 6,11-13,20,23,29 hem de kalıcılık. Bir kene 30,31 incelemek için çeşitli yollar vardır. Ancak, tükrük bezleri alırken düzgün böylece tükürük bezlerinin yırtılması veya kenenin kalıntıların kayıp değildir kene incelemek için önemlidir. Tükürük bezleri onlar ortabağırsak kontaminasyonu gidermek için …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar vektör kaynaklı hastalıkların Hayvan Kaynakları Şubesi Bölümü teşekkür etmek istiyorum, özellikle Andrea Peterson, Lisa Massoudi, Elçin O'Brien ve fare ve tavşan bakımı ve bakım için John Liddell. Biz de bu yazının doğru katkıları için Amy Ullmann, Theresa Russell, ve Barbara J. Johnson teşekkür etmek istiyorum. Son olarak, bu yazının filme ile ilgili tüm legalities yönlendirmek için grafik çizimler ve Judy Lavelle üretmek için CDC, İletişim için Associate Direktörü Office Alissa Eckert kabul etmek istiyorum.
Materials
| Reagent | Company | Catalogue Number |
| Hydrogen peroxide | Fisher | H312-500 |
| Ethanol | Acros | 61509-5000 |
| PBS | Boston Bioproducts | BM-2205 |
| Dumont Fine forceps (3C) | Fisher | NC9906085 |
| Silane treated microscope slides | Bioworld | 42763007-1 |
| Pap pen | Bioworld | 21750008-1 |
| Super frost plus microscope slides | Fisher | 12-550-18 |
| Pilocarpine | Sigma | P6503-5G |
| Protease inhibitor cocktail | Sigma | P2714 |
| #11 disposable scalpel | Feather | 2975#11 |
| Nontoxic modeling clay | Fisher | S17307 |
| Capillary tubes | Chase scientific Glass, inc | 40A502 |
References
- Quach, K. A., Boctor, F. N., Elston, D. M. What’s eating you? Hyalomma ticks. Cutis. 87, 165-167 (2011).
- Graham, J., Stockley, K., Goldman, R. D. Tick-borne illnesses: a CME update. Pediatr. Emerg. Care. 27, 141-147 (2011).
- Nuttall, P. A., Paesen, G. C., Lawrie, C. H., Wang, H. Vector-host interactions in disease transmission. J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 2, 381-386 (2000).
- Estrada-Pena, A., Jongejan, F. Ticks feeding on humans: a review of records on human-biting Ixodoidea with special reference to pathogen transmission. Exp. Appl. Acarol. 23, 685-715 (1999).
- Nuttall, P. A. Pathogen-tick-host interactions: Borrelia burgdorferi and TBE virus. Zentralbl Bakteriol. 289, 492-505 (1999).
- Jones, L. D., Hodgson, E., Nuttall, P. A. Enhancement of virus transmission by tick salivary glands. J. Gen. Virol. 70, 1895-1898 (1989).
- Labuda, M., Nuttall, P. A. Tick-borne viruses. Parasitol. 129, 221-245 (2004).
- Socolovschi, C., Mediannikov, O., Raoult, D., Parola, P. Update on tick-borne bacterial diseases in Europe. Parasite. 16, 259-273 (2009).
- Zhang, L., et al. Molecular Interactions that Enable Movement of the Lyme Disease Agent from the Tick Gut into the Hemolymph. PLoS Pathog. 7, e1002079 (2011).
- Piesman, J., Schneider, B. S. Dynamic changes in Lyme disease spirochetes during transmission by nymphal ticks. Exp. Appl. Acarol. 28, 141-145 (2002).
- Brossard, M., Wikel, S. K. Tick immunobiology. Parasitol. , S161-S176 (2004).
- Machackova, M., Obornik, M., Kopecky, J. Effect of salivary gland extract from Ixodes ricinus ticks on the proliferation of Borrelia burgdorferi sensu stricto in vivo. Folia Parasitol. 53, 153-158 (2006).
- Nuttall, P. A., Labuda, M. Tick-host interactions: saliva-activated transmission. Parasitol. 129, 177-189 (2004).
- Anguita, J., Hedrick, M. N., Fikrig, E. Adaptation of Borrelia burgdorferi in the tick and the mammalian host. FEMS Microbiol. Rev. 27, 493-504 (2003).
- Hovius, J. W., van Dam, A. P., Fikrig, E. Tick-host-pathogen interactions in Lyme borreliosis. Trends Parasitol. 23, 434-438 (2007).
- Dunham-Ems, S. M., et al. Live imaging reveals a biphasic mode of dissemination of Borrelia burgdorferi within ticks. Journal Clin. Invest. 119, 3652-3665 (2009).
- Ribeiro, J. M., Mather, T. N., Piesman, J., Spielman, A. Dissemination and salivary delivery of Lyme disease spirochetes in vector ticks (Acari: Ixodidae). J. Med. Entomol. 24, 201-205 (1987).
- Piesman, J. Transmission of Lyme disease spirochetes (Borrelia burgdorferi. Exp. Appl. Acarol. 7, 71-80 (1989).
- De Silva, A. M., Fikrig, E. Growth and migration of Borrelia burgdorferi in Ixodes ticks during blood feeding. Am. J. Trop. Med. Hyg. 53, 397-404 (1995).
- Horka, H., Cerna-Kyckova, K., Skallova, A., Kopecky, J. Tick saliva affects both proliferation and distribution of Borrelia burgdorferi spirochetes in mouse organs and increases transmission of spirochetes to ticks. Int. J. Med. Microbiol. 299, 373-380 (2009).
- Brossard, M., Wikel, S. K. Immunology of interactions between ticks and hosts. Med. Vet. Entomol. 11, 270-276 (1997).
- Wikel, S. K. Tick modulation of host immunity: an important factor in pathogen transmission. Int. J. Parasitol. 29 (99), 851-859 (1999).
- Binnington, K. C., Kemp, D. H. Role of tick salivary glands in feeding and disease transmission. Adv. Parasitol. 18, 315-339 (1980).
- Guo, X., et al. Inhibition of neutrophil function by two tick salivary proteins. Infect. Immun. 77, 2320-2329 (2009).
- Montgomery, R. R., Lusitani, D., De Boisfleury Chevance, A., Malawista, S. E. Tick saliva reduces adherence and area of human neutrophils. Infect. Immun. 72, 2989-2994 (2004).
- Lima, C. M., et al. Differential infectivity of the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi derived from Ixodes scapularis salivary glands and midgut. J. Med. Entomol. 42, 506-510 (2005).
- Severinova, J., et al. Co-inoculation of Borrelia afzelii with tick salivary gland extract influences distribution of immunocompetent cells in the skin and lymph nodes of mice. Folia Microbiol. 50, 457-463 (2005).
- Labuda, M., Jones, L. D., Williams, T., Nuttall, P. A. Enhancement of tick-borne encephalitis virus transmission by tick salivary gland extracts. Med. Vet. Entomol. 7, 193-196 (1993).
- Kariu, T., Coleman, A. S., Anderson, J. F., Pal, U. Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut. J. Vis. Exp. (48), e2544 (2011).
- Edwards, K. T., Goddard, J., Varela-Stokes, A. S. Examination of the internal morphology of the Ixodid tick Amblyomma maculatum koch, (Acari:Ixodidae); a “How-to” pictorial dissection guide. Midsouth Entomologist. 2, 28-39 (2009).
- Ledin, K. E., et al. Borreliacidal activity of saliva of the tick Amblyomma americanum. Med. Vet. Entomol. 19, 90-95 (2005).
- Ribeiro, J. M., Zeidner, N. S., Ledin, K., Dolan, M. C., Mather, T. N. How much pilocarpine contaminates pilocarpine-induced tick saliva?. Med. Vet. Entomol. 18, 20-24 (2004).
- Barker, R. W., Burris, E., Sauer, J. R., Hair, J. A. Composition of tick oral secretions obtained by three different collection methods. J. Med. Entomol. 10, 198-201 (1973).
- Burgdorfer, W. Hemolymph test. A technique for detection of rickettsiae in ticks. Am. J. Trop. Med. Hyg. 19, 1010-1014 (1970).
