Saliva, le ghiandole salivari, e Collection emolinfa dalle zecche Ixodes scapularis
Summary
La raccolta di emolinfa zecca infetta, ghiandole salivari, e la saliva è importante studiare come zecche patogeni causare la malattia. In questo protocollo si dimostra come raccogliere emolinfa ghiandole salivari e di nutrirsi<em> Ixodes scapularis</em> Ninfe. Dimostriamo anche il prelievo della saliva da femmina<em> I. scapularis</em> Adulti.
Abstract
Le zecche sono presenti in tutto il mondo e di affliggere gli esseri umani con molte malattie trasmesse da zecche. Le zecche sono vettori di agenti patogeni che causano la malattia di Lyme e zecche febbre ricorrente (Borrelia spp.), Febbre delle Montagne Rocciose (Rickettsia rickettsii), ehrlichiosi (Ehrlichia chaffeensis e E. equi), anaplasmosi (Anaplasma phagocytophilum), encefalite (tick- virus dell'encefalite Borne), babesiosi (Babesia spp.), febbre tick Colorado (Coltivirus), e la tularemia (Francisella tularensis) 1-8. Per essere correttamente trasmessi nell'ospite questi agenti infettivi differenziale regolare l'espressione genica, interagiscono con le proteine zecca, e migrano attraverso il segno di spunta 3,9-13. Ad esempio, l'agente della malattia di Lyme, Borrelia burgdorferi, si adatta attraverso l'espressione genica differenziale alle fasi festa e la carestia del ciclo di leucosi della zecca 14,15. Inoltre, come una zecca Ixodes consumafarina di sangue Borrelia replicarsi e migrare dal midgut nel hemocoel, dove si spostano per le ghiandole salivari e vengono trasmessi nell'ospite con la saliva espulsi 9,16-19.
Come un segno di spunta alimenta l'host risponde in genere con una forte risposta immunitaria innata emostatico e 11,13,20-22. Nonostante queste risposte di accoglienza, I. scapularis può alimentare per diversi giorni, perché la saliva tick contiene proteine che sono immunomodulatori, agenti litici, anticoagulanti e fibrinolysins per aiutare il segno di spunta di alimentazione 3,11,20,21,23. Le attività immunomodulanti possedute dal saliva tick o estratti di ghiandola salivare (SGE) facilitare la trasmissione, la proliferazione e la diffusione di numerose zecche patogeni 3,20,24-27. Per capire meglio come zecche agenti infettivi causare la malattia è indispensabile analizzare attivamente l'alimentazione zecche e raccogliere la saliva tick. Questo protocollo video mostra tecniche di dissezione perla raccolta di emolinfa e la rimozione delle ghiandole salivari da attivamente alimentazione I. ninfe scapularis dopo 48 e 72 ore dopo il posizionamento del mouse. Dimostriamo anche il prelievo della saliva da una femmina adulta I. scapularis tick.
Protocol
Discussion
La raccolta di emolinfa tick, ghiandole salivari, e la saliva è importante nello studio delle zecche trasmissione dei patogeni, la prevalenza, la diffusione, la proliferazione, e la persistenza sia il segno di spunta e l'host 6,11-13,20,23,29. Ci sono diversi modi per sezionare un segno di spunta 30,31. Tuttavia, quando la raccolta delle ghiandole salivari è fondamentale per analizzare correttamente il segno di spunta in modo che le ghiandole salivari non sono rotti o persi nei resti della ze…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli autori desiderano ringraziare la Divisione di Vector-Borne Diseases Branch Animal Resources, in particolare Andrea Peterson, Lisa Massoudi, Verna O'Brien e John Liddell per la loro cura e manutenzione dei topi e conigli. Vorremmo anche ringraziare Amy Ullmann, Theresa Russell, e Barbara J. Johnson per il loro contributo verso questo manoscritto. Infine, vorremmo riconoscere Alissa Eckert presso l'Ufficio del Direttore Associato per la Comunicazione presso il CDC per la produzione di illustrazioni grafiche e Judy Lavelle per dirigere tutti gli aspetti legali connessi con le riprese di questo manoscritto.
Materials
| Reagent | Company | Catalogue Number |
| Hydrogen peroxide | Fisher | H312-500 |
| Ethanol | Acros | 61509-5000 |
| PBS | Boston Bioproducts | BM-2205 |
| Dumont Fine forceps (3C) | Fisher | NC9906085 |
| Silane treated microscope slides | Bioworld | 42763007-1 |
| Pap pen | Bioworld | 21750008-1 |
| Super frost plus microscope slides | Fisher | 12-550-18 |
| Pilocarpine | Sigma | P6503-5G |
| Protease inhibitor cocktail | Sigma | P2714 |
| #11 disposable scalpel | Feather | 2975#11 |
| Nontoxic modeling clay | Fisher | S17307 |
| Capillary tubes | Chase scientific Glass, inc | 40A502 |
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