La salive, les glandes salivaires, et Collection hémolymphe de tiques Ixodes scapularis
Summary
La collection de l 'hémolymphe tique infectée, des glandes salivaires et la salive est important d'étudier comment les tiques agents pathogènes causent la maladie. Dans ce protocole, nous montrer comment recueillir les glandes salivaires et l'hémolymphe de se nourrir<em> Ixodes scapularis</em> Nymphes. Nous démontrons également le prélèvement de salive de la femelle<em> I. scapularis</em> Les adultes.
Abstract
Les tiques se trouvent dans le monde entier et affligent les humains avec de nombreuses maladies transmises par les tiques. Les tiques sont des vecteurs d'agents pathogènes qui causent la maladie de Lyme et fièvre récurrente à poux (Borrelia spp.), Rocky fièvre pourprée des montagnes (Rickettsia rickettsii), l'ehrlichiose (Ehrlichia chaffeensis et E. equi), l'anaplasmose (Anaplasma phagocytophilum), l'encéphalite (tic- virus de l'encéphalite transmise par), de la babésiose (Babesia spp.), de la fièvre à tiques du Colorado (Coltivirus), et la tularémie (Francisella tularensis) 1-8. Pour être correctement transmis à l'hôte de ces agents infectieux différentielle réguler l'expression génique, interagir avec des protéines de tiques, et migrent à travers la tique 3,9-13. Par exemple, l'agent de la maladie de Lyme, Borrelia burgdorferi, s'adapte à travers l'expression différentielle des gènes aux stades de fête et de la famine de cycle enzootique de la tique 14,15. En outre, comme une tique Ixodes consomme unerepas de sang Borrelia reproduire et migrer de l'intestin moyen dans le hémocèle, où ils se rendent aux glandes salivaires et sont transmis à l'hôte avec la salive expulsées 9,16-19.
Comme une tique se nourrit de l'hôte répond généralement avec une forte réponse immunitaire innée et hémostatique 11,13,20-22. En dépit de ces réponses de l'hôte, I. scapularis peut nourrir pendant plusieurs jours en raison salive de la tique contient des protéines qui sont immunomodulateur, des agents lytiques, les anticoagulants, et fibrinolysins pour aider la tique nourrir 3,11,20,21,23. Les activités immunomodulatrices possédés par la salive de tique ou extrait des glandes salivaires (SGE) de faciliter la transmission, la prolifération et la diffusion de nombreux agents pathogènes transmis par les tiques 3,20,24-27. Pour mieux comprendre comment tiques agents infectieux provoquer une maladie, il est essentiel de disséquer les tiques se nourrissent activement et de recueillir la salive des tiques. Ce protocole vidéo montre les techniques de dissection pourla collection de l 'hémolymphe et la suppression des glandes salivaires de nourrir activement I. nymphes scapularis après 48 et 72 heures le placement de la souris après. Nous démontrons également le prélèvement de salive d'un adulte femelle I. tique scapularis.
Protocol
Discussion
La collection de l 'hémolymphe tique, les glandes salivaires et la salive est important dans l'étude des tiques transmission d'agents pathogènes, la prévalence, la diffusion, la prolifération, et la persistance dans les deux la tique et l'hôte 6,11-13,20,23,29. Il ya plusieurs façons de disséquer une tique 30,31. Toutefois, lors de la collecte des glandes salivaires, il est essentiel de disséquer la tique proprement les glandes salivaires ne sont pas rompues ou perdu dans l…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier la Division de Vector-Borne Direction générale des ressources animales maladies, en particulier Andrea Peterson, Lisa Massoudi, Verna O'Brien, et John Liddell pour leur entretien et de maintenance des souris et des lapins. Nous aimerions également remercier Amy Ullmann, Theresa Russell, et Barbara J. Johnson pour leurs contributions à l'égard de ce manuscrit. Enfin, nous tenons à remercier Alissa Eckert dans le bureau du directeur adjoint pour la communication à la CDC pour la réalisation des illustrations graphiques et Judy Lavelle pour diriger tous les aspects juridiques liés à la prise de vue de ce manuscrit.
Materials
| Reagent | Company | Catalogue Number |
| Hydrogen peroxide | Fisher | H312-500 |
| Ethanol | Acros | 61509-5000 |
| PBS | Boston Bioproducts | BM-2205 |
| Dumont Fine forceps (3C) | Fisher | NC9906085 |
| Silane treated microscope slides | Bioworld | 42763007-1 |
| Pap pen | Bioworld | 21750008-1 |
| Super frost plus microscope slides | Fisher | 12-550-18 |
| Pilocarpine | Sigma | P6503-5G |
| Protease inhibitor cocktail | Sigma | P2714 |
| #11 disposable scalpel | Feather | 2975#11 |
| Nontoxic modeling clay | Fisher | S17307 |
| Capillary tubes | Chase scientific Glass, inc | 40A502 |
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