Генерация индуцированного регуляторных Т клеток из первичной человека наивного и Т-клеток памяти

Разработка и сопровождение иммуносупрессивных CD4 ⁺ регуляторных Т-клеток (Tregs) способствуют периферической толерантности необходимо оставаться в иммунологический гомеостаз с огромным количеством себе и комменсальных антигенов и на организм человека. Возмущения в балансе между Tregs и воспалительных обычные Т-клеток может привести к иммунопатологии или рак. Хотя терапевтические инъекции Tregs было показано, что эффективность в мышиных моделях колита ^1, тип диабета ^2, ревматоидный артрит и трансплантат против хозяина, ⁴ несколько принципиальных отличий в сравнении с человеческой мыши Treg биологии ^5, до сих пор препятствует клинического использования. Отсутствие достаточного количества, чистоты, стабильности и наведения специфику терапевтической Tregs необходимость динамическая платформа развития человека Treg, на котором для оптимизации условий для расширения своих бывших естественных ^6.

Здесь уровня Дописывать круг метод дифференциации индуцированных Tregs (iTregs) из одной человеческой периферической крови доноров, которые могут быть разбиты на четыре этапа: изоляция мононуклеарных клеток периферической крови, магнитные выбор CD4 ⁺ Т-клетки, в пробирке культуру клеток и флуоресцентных активированный сортировки клеток (FACS) Т подмножеств клеток. С Treg подпись транскрипционный фактор forkhead окно P3 (FOXP3) является активация вызванных фактором транскрипции у людей ⁷ и никакой другой уникальный маркер существует, комбинаторной панели маркеров должны быть использованы для определения Т-лимфоцитов с супрессорной активности. После шести дней в культуре клетки в нашей системе может быть разграничены на наивных Т-клеток, Т-клетки памяти или iTregs на основе их относительной выражение CD25 и CD45RA. В ячейках памяти и наивных Т имеют различные сообщил поляризации требования и пластичности ⁸ предварительной сортировки исходной популяции Т-клеток в CD45RA ^{+ +} и CD45RO подмножества может бE используется для изучения этих расхождений. В соответствии с другим, наши CD25 ^Привет CD45RA ^– iTregs экспресс высокого уровня FOXP3 ⁹ GITR и CTLA-4 ¹¹ и низкого уровня CD127 ^12. После FACS каждой популяции, полученные в результате клетки могут быть использованы в анализе супрессоров, которая оценивает относительную способность замедлить распространение карбоксифлуоресцеина сукцинимидил эфира (CFSE)-меченных аутологичных Т-клеток.