Génération de cellules T régulatrices induites de l'homme primaires cellules T naïves et mémoire

Le développement et la maintenance de CD4 ^{+ de} immunosuppresseurs des cellules T régulatrices (Treg) contribuer à la tolérance périphérique nécessaire pour rester dans l'homéostasie immunologique avec la grande quantité des antigènes du soi et commensaux à l'intérieur et sur ​​le corps humain. Perturbations de l'équilibre entre Tregs et inflammatoires cellules T conventionnelles peuvent entraîner immunopathologie ou le cancer. Bien que l'injection thérapeutique des Treg a été démontré pour être efficace dans des modèles murins de la colite ^1, diabète de type I ^2, la polyarthrite rhumatoïde et maladie du greffon contre l'hôte, ⁴ plusieurs différences fondamentales dans l'homme par rapport à la souris Treg biologie ⁵ a jusqu'à présent empêché l'utilisation clinique. L'absence d'un nombre suffisant, la pureté, la stabilité et la spécificité de ralliement de la thérapeutique Tregs a nécessité une plate-forme dynamique de développement humain, sur laquelle Treg afin d'optimiser les conditions de leur expansion ex vivo ^6.

Ici, nous D ÀEscribe une méthode pour la différenciation des lymphocytes T régulateurs induits (iTregs) à partir d'un seul donneur de sang périphérique humain qui peut être décomposé en quatre étapes: l'isolement de cellules mononucléées du sang périphérique, la sélection magnétique de cellules T CD4 ^+, dans la culture cellulaire in vitro et activé par fluorescence tri cellulaire (FACS) de sous-ensembles de lymphocytes T. Depuis la transcription Treg facteur de la signature P3 boîte de forkhead (FoxP3) est un facteur de transcription induite par activation chez les humains ⁷ et aucun autre marqueur unique existe, un panneau de combinatoire des marqueurs doit être utilisé pour identifier les cellules T avec une activité suppresseur. Après six jours de culture, les cellules de notre système peut être délimitée en cellules T naïves, les cellules T mémoires ou iTregs en fonction de leur expression relative de la CD25 et CD45RA. Comme les cellules T mémoires et naïves avoir des exigences différentes de polarisation signalés et plasticités ^8, pré-tri de la population de cellules T initial en CD45RA ⁺ et CD45RO ⁺ sous-ensembles peuvent be utilisé pour examiner ces divergences. Conformément à d'autres, notre CD25 ^Salut CD45RA ^– iTregs expriment des niveaux élevés de FoxP3 ^9, GITR et CTLA-4 ¹¹ et de faibles niveaux de CD127 ^12. À la suite FACS de chaque population, des cellules résultantes peut être utilisé dans un dosage suppresseur qui évalue la capacité par rapport à retarder la prolifération carboxyfluorescéine ester succinimidylique (CFSE)-marqué cellules T autologues.