שתי שיטות שונות על צמחים מסך עם השורש קושר את נמטודות מתוארים. הגישות שתוארו כוללות תפוקה גבוהה מסכים עם נמטודות באופן הורסות להקל על השימוש בצמחים אלה בתוכניות רבייה.
השורש קושר את נמטודות (הסוג Meloidogyne) הם טפילים צמחים המחייבות. הם polyphagous מאוד נחשב לאחד החשובים ביותר נמטודות צמחים טפילים מבחינה כלכלית. מיקרוסקופית השלב השני נעורים (J2), נשל פעם הביצה, הוא השלב של התולעת. J2s את בוקעים מן הביצים, לנוע בחופשיות באדמה בתוך הסרט של מים, ולאתר טיפים שורש של מיני צמחים מתאימים. לאחר חדירה שורש הצמח, הם נודדים אל הגליל כלי הדם שם הם להקים אתר האכלה וליזום האכלה באמצעות stylets שלהם. האתר האכלה תאיים מורכב מספר תאים הנקראים multinuclear מוגדלים של התאים ענק של דבר נוצרים תאים שעברו karyokinesis (חזר מיטוזה) ללא cytokinesis. תאים pericycle השכנות הפרד להגדלה בגודל והוליד המרה רגילה או הקשר שורש, סימפטום אופייני של זיהום שורש הקשר נמטודות. לאחר ההאכלה הוא יזם, J2s להיות פעילים ובטלdergo שלושה molts נוספים להיות מבוגרים. הנקבה הבוגרת מטילה ביצים 150-250 במטריצה דביקות או מתחת לפני השטח של השורש. מן הביצים בוקעים J2s זיהומיות חדשים ולהתחיל מחזור חדש. שורש הקשר מחזור החיים נמטודות הושלמה ב 4-6 שבועות 26-28 ° C.
כאן אנו מציגים את הפרוטוקול המסורתית להדביק צמחים הגדלים בעציצים, עם השורש, ומשלב את נמטודות ואת שתי שיטות מבחני תפוקה גבוהה. השיטה הראשונה תפוקה גבוהה משמש בצמחים בעלי זרעים קטנים כגון עגבניות ואילו השני הוא לצמחים בעלי זרעים גדולים כגון שעועית cowpea משותף. זרעים גדולים לתמוך בצמיחה שתיל ממושך עם תוסף תזונתי מינימלי. Assay 1 תפוקה גבוהה מנצל שתילים שגודלו חול מגשי בעוד הצמחים assay השני מגדלים שקיות בהעדר אדמה. נרתיק גידול שתיל עשוי הפתיל 15.5 x 12.5cm נייר, מקופל בראש להקים שוקת 2 ס"מ עמוק שבו זרע או שתיל ממוקמת.הפתיל נייר נכלל בתוך כיס פלסטיק שקוף. אלה שקיות הצמיחה לאפשר תצפית ישירה של זיהום תסמיני נמטודות, מהחוצפה של שורשים לייצור המוני ביצה, מתחת לפני השטח של כיס שקוף. שתי השיטות לאפשר את השימוש הצמחים הוקרן, לאחר phenotyping, למעבר או הזרעים הייצור. יתרון נוסף של השימוש שקיות הצמיחה היא הדרישה שטח קטן בגלל שקיות מאוחסנים בתיקיות פלסטיק תלויים מדפים מסודרים.
יש שני שלבים קריטיים עבור המסך נמטודות מוצלח: הכנת הבידוד זיהומיות מאוד באמצעות צמחים בשלב התפתחותי תקין. שיעור הבקיעה של שורש, פקעת ביצים נמטודות הוא משתנה מאוד ונע בין 5 ל – 50%. לכן כדי להשיג רמות אופטימליות של הפתח J2s זיהומיות ביותר, תשומת לב רבה יש לשלם מיצוי הליכים ביצה הבקיעה. הביצים צריכים להיות חשופים אקונומיקה למשך זמן מינימלי אקונומיקה יש לשטוף היטב את התערובת מן השורש. כאשר הבקיעה את הביצים, slurry המכיל את הביצים לא צריך להיות שקוע במים. בנוסף, יש להימנע לשפוך את הביצים לתוך צלחת פטרי הבסיסי שבו בקעו צעירים נאספים. דרך אחת להימנע לשפוך את הביצים תוך כדי תהליך הבקיעה הוא לא להוסיף מים ישירות Kimwipe כמו נייר עשוי להישבר. במקום להוסיף את המים ישירות אל צלחת פטרי.
לקבלת התוצאות הטובות ביותר, השתמש J2s שבקעו זה עתה. אם hatcשיעור H נמוך הבידוד יותר יש צורך, J2s ניתן לאחסן על 15 מעלות צלזיוס למשך תקופה ארוכה. לחמם את הבידוד המאוחסן בטמפרטורת החדר כדי להחיות את נמטודות שקדמו חיסון. עם זאת, אין לאחסן את J2s לתקופות ממושכות אפילו 15 מעלות צלזיוס כ J2s מורעבים לא להדביק ביעילות.
שתילים צעירים בשלב ההתפתחותי הטוב ביותר עבור חיסון שורש הקשר נמטודות. עם זאת, זה צריך להיות מאוזן עם הקמתה של מערכת שורשים נאותה לספק בכמות מספקת של טיפים שורש כמו נקודות הכניסה עבור J2s את. שמירה על מצב אופטימלי גידול צמחים חיוני גם עבור המסכים. הימנע יתר משקים צמחים במיוחד אלה גדל שקיות. יתר משקה את שקיות, כפי שצוין על ידי מים עומדים בבית התחתון של הנרתיק, יכול לקדם את צמיחת הפטרייה ולצמצם בריאות השורש.
עם הערכה מבחני הן עוד יותר של זיהום נמטודות וחישוב של מספר ביצים / מערכת שורש וביצים / גרם freהשורש ש ניתן לבצע. עבור מבחני העגבניות, שורשים בודדים שקל וביצים שחולצו כפי שתואר על הבידוד הכנה (סעיף 3). בעת עיבוד של מספר גדול של דגימות צמחים, מערכות שורש בודדים ניתן macerated באמצעות בלנדר להפקת הביצים. מספר הביצים יש לספור לפחות שלושה aliquots והביצים / גרם שורש טרי של מערכת מחושב. עבור מבחני כיס, מערכת השורשים היא הסירה את הכנס נייר, שקל, וביצים חילוץ.
The authors have nothing to disclose.
מחקר Kaloshian המעבדה ממומנת על ידי מענק מטעם ארצות הברית המכון הלאומי המזון והחקלאות (2007-35607-17765). מחקר רוברטס המעבדה ממומנת על ידי תרומות של ארצות הברית הסוכנות לפיתוח בינלאומי (GDG-G-00-02-00012-00 ו-EDH-00-07-00005) ו יבש קליפורניה עמוד שעועית המייעצת.
Compound | Concentration |
KNO3 | 5 mM |
Ca(NO3)2 • 4 H2O | 5 mM |
MgSO4 • 7H2O | 2 mM |
KH2PO4 | 1 mM |
Hamp-ene Fe EDTA 13.0% | 1 mM |
H3BO3 | 46 μM |
MnCl2 • 4H2O | 9 μM |
ZnSO4 • 7H2O | 0.00076 μM |
CuSO4 • 5H2O | 0.00032 μM |
(NH4)6Mo7O24 • 4H2O | 0.00016 μM |
Table 1. Reagents for Hoagland’s solution.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Erioglaucine | Fisher | AC22973-0250 | |
Miracle-Gro for tomato | Scotts Miracle-Gro | 18-18-21 | |
Osmocote | Scotts Miracle-Gro | ||
Seedling growth pouches | Mega International | ||
Sieve 25 μm | H & C Sieving Systems | 3886 | US standard #500 |
Sieve 90 μm | H & C Sieving Systems | 3880 | US standard #170 |
Sieve 425 μm | H & C Sieving Systems | 3871 | US standard #40 |
Sunshine mix | Sun Gro Horticulture Canada |
Table 2. Table of specific reagents and equipment.