Détection de multiplication et un clone moléculaire infectieux du virus Maedi-visna qui exprime Green Fluorescent Protein
Summary
Nous décrivons un clone moléculaire du maedi-visna qui exprime la GFP et est entièrement infectieuses. La réplication de ce virus peut être détecté en utilisant la microscopie par fluorescence et la cytométrie de flux.
Abstract
Maedi-visna (MVV) est un lentivirus de moutons, provoquant lentement progressive pneumonie interstitielle et d'encéphalite 1. Les cellules cibles primaires du MVV in vivo sont considérés comme des 2 lignée des monocytes. Certaines souches de MVV peuvent se reproduire dans d'autres types cellulaires, toutefois 3,4. La protéine fluorescente verte est un marqueur couramment utilisé pour étudier les lentivirus dans des cellules vivantes. Nous avons inséré le gène EGFP dans le gène codant pour dUTPase du MVV. Le gène dUTPase est bien conservée dans la plupart des souches de lentivirus des ovins et caprins et a été montré pour être important dans la réplication du CAEV 5. Toutefois, dUTPase a été montré pour être dispensable pour la réplication du clone moléculaire de MVV utilisées dans cette étude in vitro et in vivo 6. Réplication MVV est strictement limitée aux cellules de mouton ou de chèvre d'origine. Nous utilisons une lignée de cellules primaires de la choroïde de mouton du plexus (cellules SCP) pour la transfection et la propagation du virus 7. La MVV fluorescente est entièrement infectieuses et expression de l'EGFP est stable pendant au moins six passages 8. Il ya une bonne corrélation entre les mesures de DICT 50 et EGFP. Ce virus devrait donc être utile pour la détection rapide des cellules infectées dans les études du tropisme cellulaire et la pathogénicité in vitro et in vivo 8.
Protocol
Discussion
La GFP exprimer clone moléculaire de MVV présentés ici devraient être utiles pour analyser les interactions de la cellule hôte et la pathogénicité du MVV fois in vitro et in vivo. Le virus obtenu après 7-14 jours de la réplication a incontestablement acquis une certaine mutations dues à l'imprécision de la transcriptase inverse. Cependant, il ya des limites à l'utilisation de ce clone comme un vecteur seul cycle. La première est que l'utilisation du clone est restreinte aux cellules de moutons e…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été financé par le Fonds de recherche en islandais et l'Université d'Islande Fonds pour la recherche.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| DMEM | Gibco | 10938025 |
| Opti-MEM | Gibco | 51985018 |
| Lipofectamine 2000 | Invitrogen | 11668019 |
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