Misura della Ca citosolico ^{2 +} In isolati Linfatici contrattile

Vasi linfatici comprende un sistema multifunzionale di trasporto che mantiene l'omeostasi dei fluidi, fornisce i lipidi alla circolazione centrale, e agisce come un sistema di sorveglianza per gli antigeni potenzialmente dannosi, ottimizzando l'immunità mucosale e la risposta immunitaria adattativa ^1. La linfa è formata da liquido interstiziale che entra linfatici iniziali cieco-ended, e poi viene trasportata contro un gradiente di pressione in grandi vasi linfatici di raccolta. Ogni linfatico raccolta è costituita da una serie di segmenti chiamati lymphangions, separati da valvole bicuspide che impediscono il riflusso. Ogni lymphangion possiede un ciclo contrattile che spinge linfa contro un gradiente di pressione verso la circolazione centrale ^2. Questo modello contrattile fasica è analogo al ciclo cardiaco, con fasi sistolica e diastolica, e con un ⁴ contrazione minore frequenza. Inoltre, il muscolo liscio linfatico genera tono e visualizza la costrizione e la dilatazione miogenica in risposta ad aumenti e diminuzioni della pressione luminale, rispettivamente ^5. Un ibrido di meccanismi molecolari che supportano sia la contrattilità fasica e tonica dei vasi linfatici sono quindi proposti.

Contrazione della muscolatura liscia è generalmente regolata dal Ca ^{2 +} citosolico concentrazione ([Ca ^{2 +]} _i) più sensibilità al Ca ^{2 +,} degli elementi contrattili in risposta ai cambiamenti nell'ambiente che circonda la cellula ^6. [Ca ^{2 +]} _i è determinato dalla combinazione del movimento di Ca ^{2 +} attraverso la membrana plasmatica legante o tensione gated canali Ca ^{2 +} e il rilascio e l'assorbimento di Ca ^{2 +} dalle riserve interne. Citosolico di Ca ^{2 +} si lega alla calmodulina e attiva gli enzimi come la catena leggera della miosina (MLC) chinasi (MLCK), che a sua volta fosforila MLC porta alla actina-miosina-mediata contrazione ^8. Tuttavia, la sensibilità di questa via di Ca <sup> 2 + può essere regolata dalla fosfatasi MLC (MLCP) ^9. MLCP attività è regolata da Rho chinasi (ROCK) e l'inibitore della proteina fosfatasi miosina CPI-17.

Qui vi presentiamo un metodo per valutare le variazioni [Ca ^{2 +]} _i nel tempo isolato, linfatici perfuso al fine di studiare Ca ^{2 +-dipendente} e Ca ^{2 +-sensibilizzante} meccanismi della contrazione muscolare liscia linfatico. Utilizzando isolato linfatici mesenterica di ratto raccolta abbiamo studiato tratto cambiamenti indotti in [Ca ^{2 +]} _i e l'attività contrattile. Il modello linfatico isolato offre il vantaggio che la pressione, flusso, e la composizione chimica della soluzione bagno può essere strettamente controllati. [Ca ^{2 +]} _i è stato determinato dal carico linfatico con il raziometrici, Ca ^{2 +-binding} dye Fura-2. Questi studi forniranno un nuovo approccio al problema più ampio di studiare i diversi meccanismi molecolari che regolano fasicacontrazioni tonico contro costrizione nel muscolo liscio linfatico.