Medição do Ca citosólico ^{2 +} Em Isolated linfáticos contráteis

Vasos linfáticos formam um sistema de transporte multifuncional que mantém a homeostase dos fluidos, oferece lípidos para a circulação central, e atua como um sistema de vigilância para os antígenos potencialmente prejudiciais, otimizando a imunidade da mucosa e respostas imunes adaptativas ^1. A linfa é formado a partir de líquido intersticial que entra cego-ended linfáticos iniciais, e depois é transportado contra um gradiente de pressão na maior sistema linfático coleta. Cada linfáticos é composta de uma série de segmentos chamados lymphangions, separados por válvulas bicúspide, que impedem o refluxo. Cada lymphangion possui um ciclo de contração que impulsiona linfáticos contra um gradiente de pressão para a circulação central ^2. Este padrão contrátil fásica é análogo ao do ciclo cardíaco, com fases sistólica e diastólica, e com menor freqüência ⁴ contração. Além disso, o músculo liso linfático gera tom e exibe miogênica constrição e dilatação in resposta a aumentos e diminuições na pressão luminal, respectivamente ^5. Um híbrido de mecanismos moleculares que suportam tanto a contratilidade fásicas e tônicas dos vasos linfáticos são assim propostas.

Contração do músculo liso é geralmente regulado pelo Ca ^{2 +} citosólico concentração ([Ca ^{2 +]} _i) a sensibilidade de mais para Ca ^{2 +,} dos elementos contrátil em resposta a mudanças no ambiente ao redor da célula ^6. [Ca ^{2 +]} _i é determinado pela combinação do movimento do Ca ^{2 +} através da membrana plasmática ligante ou tensão gated Ca ^{2 +} e canais a liberação e absorção de Ca ^{2 +} das lojas internas. Citosólica de Ca ^{2 +} se liga a calmodulina e ativa enzimas como a cadeia leve de miosina (MLC) quinase (MLCK), que por sua vez fosforila MLC levando a actina-miosina-contração mediada ^8. No entanto, a sensibilidade desta via de Ca <sup> 2 + pode ser regulada pela fosfatase MLC (MLCP) ^9. MLCP atividade é regulada por Rho quinase (Rock) e da proteína miosina inibidor da fosfatase CPI-17.

Aqui, apresentamos um método para avaliar as alterações na [Ca ^{2 +]} _i ao longo do tempo isolado, vasos linfáticos perfundidos para estudar Ca ^{2 +-dependente} e Ca ^{2 +-sensibilizar} os mecanismos de contração do músculo liso linfático. Usando linfáticos mesentéricos isolados de ratos coletando estudamos estiramento induzido por mudanças na [Ca ^{2 +]} _i e atividade contrátil. O modelo linfático isolado oferece a vantagem de pressão, fluxo e da composição química da solução de banho podem ser bem controladas. [Ca ^{2 +]} _i foi determinado pela carga linfáticos com o raciométrica, Ca ^{2 +-binding} corante Fura-2. Estes estudos fornecem uma nova abordagem ao problema mais amplo de estudar os diferentes mecanismos moleculares que regulam fásicacontrações contra constrição tônica no músculo liso linfático.