Mesure de cytosolique de Ca ^{2 +} En isolé lymphatique contractiles

Les vaisseaux lymphatiques constituent un système de transport multifonctionnel qui maintient l'homéostasie des fluides, offre des lipides dans la circulation centrale, et agit comme un système de surveillance pour les antigènes potentiellement dangereux, l'optimisation de l'immunité des muqueuses et des réponses immunitaires adaptatives ^1. La lymphe est formé à partir du liquide interstitiel qui pénètre aveugle clos lymphatiques initiaux, puis est transporté contre un gradient de pression dans les grandes lymphatiques collecte. Chaque lymphatique collecte est constitué d'une série de segments appelés lymphangions, séparées par des valves bicuspides qui empêchent le reflux. Chaque lymphangion possède un cycle de contraction qui propulse lymphatiques contre un gradient de pression vers la circulation centrale ^2. Ce schéma est analogue phasique contractiles au cycle cardiaque, avec la tension systolique et diastolique phases, et avec une fréquence inférieure ⁴ de contraction. En outre, les muscles lisses lymphatique génère ton et affiche une constriction myogénique et la dilatation in réponse aux augmentations et des diminutions de la pression luminale, respectivement ^5. Un hybride des mécanismes moléculaires qui favorisent à la fois la contractilité phasique et tonique du système lymphatique sont ainsi proposées.

Contraction du muscle lisse est généralement réglementé par le Ca ^{2 +} cytosolique de concentration ([Ca ^{2 +]} _i), plus la sensibilité au Ca ^{2 +,} des éléments contractiles en réponse aux changements dans l'environnement entourant la cellule ^6. [Ca ^{2 +]} _i est déterminée par la combinaison du mouvement de Ca ^{2 +} à travers la membrane plasmique ligand ou la tension fermée canaux Ca ^{2 +} et de la libération et l'absorption de Ca ^{2 +} dans les magasins internes. Cytosolique de Ca ^{2 +} se lie à la calmoduline et active les enzymes telles que la chaîne légère de myosine (MLC) kinase (MLCK), qui à son tour phosphoryle MLC menant à l'actine-myosine médiée contraction de ^8. Cependant, la sensibilité de cette voie à Ca <sup> 2 + peut être réglementée par la phosphatase MLC (MLCP) ^9. L'activité est réglementée par MLCP Rho kinase (ROCK) et la protéine myosine inhibiteur de phosphatase IPC-17.

Ici, nous présentons une méthode pour évaluer les changements de [Ca ^{2 +]} _i au cours du temps dans des régions isolées, les lymphatiques perfusé afin d'étudier Ca ^{2 +-dépendante} et Ca ^{2 +-sensibilisant} les mécanismes de la contraction musculaire lisse lymphatique. L'utilisation isolée lymphatiques mésentériques du rat collecte que nous avons étudié l'étirement induit des changements de [Ca ^{2 +]} _i et de l'activité contractile. Le modèle lymphatique isolé offre l'avantage de pression, débit, et la composition chimique de la solution de bain peut être étroitement contrôlées. [Ca ^{2 +]} _i est déterminé par le chargement des lymphatiques avec les ratiométrique, Ca ^{2 +} contraignant colorant Fura-2. Ces études fourniront une nouvelle approche au problème plus large de l'étude des différents mécanismes moléculaires qui régulent phasiquecontractions toniques contre la constriction des muscles lisses lymphatique.