L'utilisation du modèle EpiAirway pour Caractériser long terme Interactions hôte-pathogène

Haemophilus influenzae non typables (NTHi) sont humains adaptés bactéries Gram-négatives qui peuvent causer des infections récurrentes et chroniques de la muqueuse respiratoire ^{1, 2.} Pour étudier les mécanismes par lesquels ces organismes survivent et à l'intérieur des tissus des voies respiratoires, un modèle dans lequel réussite à long terme de co-culture de bactéries et de cellules humaines peuvent être réalisées est nécessaire. Nous utilisons des primaires respiratoire humain tissus épithéliaux soulevées à l'interface air-liquide, le modèle EpiAirway (MatTek, Ashland, MA). Ce sont des non-immortalisés, bien différencié, 3-dimensionnelle des tissus qui contiennent des jonctions serrées, cellules ciliées et non ciliées, des cellules caliciformes qui produisent la mucine, et conserver la capacité de produire des cytokines en réponse à l'infection.

Cette biologiquement pertinentes modèle in vitro de la voie aérienne supérieure humaine peut être utilisée dans un certain nombre de façons, l'objectif global de cette méthode consiste à effectuer à long terme de co-culture de tissus EpiAirway avec NTHi et quantifier les bactéries associées aux cellules et intériorisé au fil du temps . De même, la production de mucine et le profil des cytokines de l'infection co-cultures peuvent être déterminées. Cette approche améliore les méthodes existantes dans ce nombreux protocoles actuels utilisent des cultures monocouches ou submergés Transwell de cellules humaines, qui ne sont pas capables de soutenir les infections bactériennes sur de longues périodes ^3. Par exemple, si un organisme peut se répliquer dans les médias sus-jacent, ce qui peut entraîner des niveaux inacceptables de la cytotoxicité et la perte de cellules de l'hôte, en arrêtant l'expérience. Le modèle permet de caractériser EpiAirway long terme interactions hôte-pathogène. En outre, depuis la source de la EpiAirway est normal humaine trachéo-bronchique cellules plutôt que d'une ligne immortalisé, chacun est une excellente représentation de tissus humains réels des voies respiratoires supérieures, tant dans sa structure et dans la fonction ^4.

Pour cette méthode, les tissus sont EpiAirway sevrés de composés anti-microbiens et anti-fongique pour 2 jours avant la livraison, et toutes les procédures sont exécutées sous antibiotique sans conditions. Cela nécessite des considérations spéciales, puisque les bactéries et les principaux tissus humains sont utilisés dans la même armoire de biosécurité, et sont co-cultivées pendant des périodes prolongées.