وPCR لتحديد Allelotyping السالمونيلا enterica serovars الملهبة ، الهدار ، هايدلبرغ ، والتيفية الفأرية

1. إعداد قالب PCR ملاحظة : من أجل تقليل التلوث المرحل PCR ، فمن المهم للحفاظ على عدة خطوات رئيسية هامة في PCR جسديا منفصلة عن بعضها البعض : 1) إعداد (DNA) القالب ، 2) PCR الإعداد ، و 3) هلام إستشراد. ويوصى أيضا لاستخدام حاجز نصائح من أجل منع أو الثقافة أو كاشف تلوث pipetters. تلقيح 1 مل من مرق لوريا Bertani أو متوسطة المعقدة الأخرى (تسريب الدماغ والقلب ، Superbroth ، الخ) مع عزل السالمونيلا من مستعمرة معزولة واحدة. احتضان الثقافة بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية. نقل 1 مل إلى العقيمة ، أنبوب 1.5 مل microfuge القدرات ، ووقف الطرد المركزي في الخلية البكتيرية 4500 x ج لمدة 2 دقيقة ~. إلى خلايا بيليه. صب طاف ، resuspend الكرية خلية في 1 مل من الإيثانول بنسبة 100 ٪ والتي وضعت في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقيقة. كما كان من قبل الخلايا بيليه (4500 x ج ، 2 دقيقة) ، وإزالة الخلايا وطاف في برنامج تلفزيوني resuspend 1 مل. خلايا جهاز الطرد المركزي (4500 x ج ، 2 دقيقة) ، والتخلص من الخلايا طاف resuspend في 1 مل من العقيمة O. 2 درهم تمييع تعليق خلية النهائي 20/01 في DH 2 O (5 μl/95 ميكرولتر درهم 2 O) وتخزينها في -20 درجة مئوية. العمر الافتراضي للخلايا كله كقالب PCR -20 درجة مئوية في حوالي شهر واحد. 2. PCR الإعداد ملاحظة : إعداد وصرفها من مزيج تفاعل PCR (القالب ، مخازن ، oligonucletoideprimers ، النيوكليوتيدات وطق بوليميريز الحمض النووي) يحتاج إلى أن يكون أداؤها في غرفة منفصلة مخصصة جسديا ويفضل أن يكون عمله في محطة PCR / الأشعة فوق البنفسجية. ملاحظة : تعيين PCR تصل الغرفة يجب أيضا أن تكون مكتفية ذاتيا مع المجمد -20 درجة مئوية معينة لتخزين الكواشف PCR (مخازن والشعائل قليل النوكليوتيد ، والنيوكليوتيدات) ، والانزيمات والقالب ، pipetter مخصصة لإعداد مجموعة PCR ، المتاح القفازات المطاطية والمختبر ومعطف ، نصائح الحاجز ، لوحات microtiter والزجاج الشعيرات الدموية ، وأنابيب microfuge ، والتبييض 10 ٪ لتطهير الأسطح. استخدام مجموعة pipetter مخصص (P10 ، P100 ، وP1000) إلى الاستغناء الكواشف PCR. هذا يجب أن لا تترك مجموعة ماصة للانشاء محطة. ملاحظة : الحصول على البيولوجيا الجزيئية أو PCR الصف درهم O 2 و 1 مل قسامة إلى 1.5 مل أنابيب الطرد المركزي القدرات. الاستغناء aliquoted درهم 2 O بعد كل استعمال لتجنب احتمال التلوث عبر. ويوصى باتباع نهج مماثل مع PCR الكواشف الأخرى. ملاحظة : تطهير منطقة العمل قبل استعماله مع الإضاءة فوق البنفسجية و / أو مسح أسفل الأسطح مع التبييض 10 ٪. ارتداء معطف المختبر وقفازات مطاطية في أداء PCR الإعداد. تقليل حركة المرور ذهابا وإيابا من PCR – تعيين ما يصل إلى المناطق التي حضنت ردود الفعل PCR في thermocylcer والمنتجات PCR (amplicons) يتم فصل المواد الهلامية على agarose. إذا كنت أعود إلى منطقة انشاء PCR ، والتخلص من زوج من القفازات المطاطية كنت ترتدي في الوقت الراهن ووضع على زوج جديد من القفازات. جعل الأسهم التمهيدي الماجستير في DH 2 س إلى تركيز 5×10 م -4 تمييع الاشعال 20/01 في DH 2 O (5 μl/95 ميكرولتر درهم 2 س و 25 ميكرومتر). يوصف تسلسل قليل النوكليوتيد لكل التمهيدي كتابة فلاجيلين في الجدول 1. استرداد PCR الكواشف والقالب من الثلاجة -20 درجة مئوية ، والسماح الكواشف والعينات إلى ذوبان الجليد من على الثلج. ترك الحمض النووي بوليميريز طق في الثلاجة لحين الحاجة إليها. الكواشف الاستغناء عن مزيج allelotyping تفاعل PCR كما هو موضح في الجدول رقم 1. الاستغناء 9μl من مزيج تفاعل PCR في كل من 10 بئرا في الجولة أسفل عقيمة ، 96 – جيدا ، لوحة البوليسترين microtiter ، بدءا من الجزء العلوي من العمود (على سبيل المثال A1) وتتحرك إلى أسفل العمود إلى أعلى المقبل. إضافة 1 ميكرولتر من 2 O درهم إلى 9 من مزيج ميكرولتر PCR (أي سيطرة DNA) إلى البئر الأولى (A1) ، 0.5μl من القوالب السيطرة الايجابية (ط / ز ، ط ، التيفية الفأرية كتابة الاشعال والملهبة ؛ r/z10 كتابة الاشعال هايدلبرغ وهدار ، و1،2 / ه ، ن ، س ، التيفية الفأرية كتابة الاشعال وهدار) إلى 9 ميكرولتر من مزيج PCR في الثانية 2 جيدا (B1) ، و 1 ميكرولتر من القولونية K12 DH5α إلى 9 مل من مزيج PCR في البئر الثالثة (C1). لكل بئر إضافية (D1 – H1 ، A2 ، B2) ، إضافة 1 ميكرولتر من قالب نموذج لإذابة ميكرولتر 9 من مزيج تفاعل PCR. لS. ط / ز ، م allelotyping PCR ، enterica ضرب مصلي التيفية الفأرية (ط) و الملهبة (ز ، م) بمثابة الضوابط الإيجابية ، والسالمونيلا serovars هايدلبرغ (ص) وهدار (Z10) هي الضوابط الإيجابية للص / ض 10 allelotyping PCR متعددة. 10 ميكرولتر مكان القدرة الزجاج في الشعيرات الدموية أصحاب المخصصة للتكنولوجيا Rapidcycler ايداهو (8). مرة واحدة في المضمون حامل ، وتحميل كل الزجاج مع مزيج شعري تفاعل PCR عن طريق لمس شعري لقاع الآبار من لوحة microtiter. إمالة حامل للسماح للتحرك السائل أسفل أنبوب وتوفير المساحة بين طرفي والمزيج PCR الحرارة قبل اغلاق أنابيب زجاجية مع الشعلة البوتان لختم كلا طرفي من الشعيرات الدموية. مكان الأنابيب الشعرية وحامل في ولاية ايداهو Rapidcycler التكنولوجيا واستخدام برامج thermocycler وصفها في الجدول (1) لالاشعال allelotyping مختلفة لتشغيل PCR. انتقل إلى الخطوة هلام إستشراد عند اكتمال برنامج thermocycler. 3. هلام إستشراد ملاحظة : ارتداء معطف المختبر المختلفة المخصصة لاستخدامها في المختبر الكهربائي وزوج جديد من القفازات مطاطيا. ملاحظة : ملابس فوق البنفسجية نظارات واقية أو درع العين الوجه وكانوا دائما القفازات عند التعامل مع إيثيديوم بروميد ، وخصوصا المواد الهلامية agarose. تحضير 100 مل المنصهر 1.5 ٪ (W / V) البيولوجيا الجزيئية في الصف agarose 1xTAE (أو 1X TBE) العازلة الكهربائي (7) عن طريق التسخين مرارا تعليق agarose في الميكروويف وضعت في السلطة 20 ٪ لفترات دقيقة 2-5 مع البصرية الدوري التفتيش. تعيين agarose المنصهر في حمام الماء 60 درجة مئوية حتى equilibrates إلى درجة حرارة حمام الماء. إعداد العفن هلام مع المشط قبل صب agarose المنصهر. اختيار مشط بأسنان هلام كافية لانتاج ما يكفي من الآبار لضوابط ، والعينات ، وعلى الأقل 3 معايير الوزن الجزيئي للمواضع لها في نهايات ووسط agarose هلام. إضافة 2 ميكرولتر من بروميد إيثيديوم (10 ملغ / مل) إلى 100 مل من المنصهر 1.5 ٪ (W / V) في agarose 1xTAE (أو TBE) ، زجاجة دوامة بلطف لمزج وتجنب فقاعات المنتجة ، وتصب بلطف محتويات الزجاجة في منتصف القالب الجل لمدة 15 بمقدار 10 سم agarose هلام. استخدام حافة المناديل الورقية أو منشفة ورقية لإزالة أي فقاعات في agarose هلام. السماح لمجموعة هلام العفن في درجة حرارة الغرفة حتى يتصلب agarose (~ 30-45 دقيقة). نقل علبة هلام مع الجل ومشط للالغاطسة ، والأفقية التي تحتوي على غرفة الكهربائي 1X TAE (أو 1X TBE) العازلة الكهربائي. إزالة بلطف المشط من الجل agarose. الاختيار وضع علبة هلام النسبي إلى الكاثود أو القطب الموجب للغرفة الكهربائي للتأكد من هذا القطب هو في الجزء السفلي من هلام. ملاحظة : تذكر الحمض النووي سالبة الشحنة بترحيل نحو القطب السالب (أي "تشغيل إلى الأحمر"). بريميكس 200 ميكرولتر من علامات الحمض النووي الوزن الجزيئي (0.25 ميكروغرام / ميكرولتر) مع 40 ميكرولتر من الحمض النووي صبغ 6X تحميل. تحميل 4.8 ميكرولتر من الحمض النووي الجزيئية خلط الوزن ماركر الرابع عشر للآبار ، أولا المتوسطة والأخيرة. تحميل كل من العينات بدءا من 2 PCR جيدا وتقدم على كل بئر لاحقة ، والانتقال من اليسار إلى اليمين. تجنب تحميل العينة في أي من الآبار التي تحتوي على معيار الوزن الجزيئي. لتحميل العينات الواردة في كل من الزجاج الشعرية : إزالة كل شعيرة من حامله وحفر طرفي الشعرية مع قطع الزجاج. مكان الابهام والسبابة من كلتا اليدين على جانبي الشعرية التي تميزت قطع الزجاج واطبق الشعرية. مكان العبوة الشعرية على الطرف المقابل من مزيج تفاعل PCR وتتحول ببطء في اتجاه عقارب الساعة حتى المكبس السائل في الجزء السفلي للغاية من الأنبوب. ضع الشعرية في البئر إلى أن يتم تحميل وتشغيل المكبس ببطء في اتجاه عقارب الساعة في صرف عينة Ficoll المرجحة في agarose جيدا. يجب الحرص على عدم ثقب البئر مع شعري أو إدخال فقاعة الهواء إلى البئر التي تحول الكثير جدا في الماضي عندما كان آخر من يترك السائل الشعرية. حالما يتم تحميل جميع العينات والمعايير ، وضبط الجهد المستمر لامدادات الطاقة الى 90 V (9 فولت / سم agarose هلام). وقف الكهربائي مرة واحدة في صبغ أصفر (Taurazine) من الأمام هو 1 سم من الجزء السفلي من هلام. بمجرد اكتمال الكهربائي ، ونقل إلى الجل transilluminator الأشعة فوق البنفسجية لتصور شظايا من الحمض النووي والجزيئي معيار الوزن. التقاط الصورة على فيلم باستخدام كاميرا بولارويد بولارويد مع البرتقال الزجاج تصفية (الإعدادات : 2 س ، و ص 4،5) أو على شكل صورة رقمية باستخدام كاميرا CCD والصورة المطبوعة مع طابعة حرارية. مكان أصحاب الشعرية في المبيض بنسبة 10 ٪ عن 15-30 دقيقة. شطف 3 مرات مع DH 2 O والمكان مرة أخرى في غرفة الإعداد PCR في الهواء الجاف. 4. ممثل ملتيبليكس نتائج PCR النتائج لPCR allelotyping من السالمونيلا المعزولة تظهر في الشكل 1-10 1 (الممرات 3-12) وتفسيرها على النحو التالي. يتم إعطاء تسمية أليل O لعزل السالمونيلا استنادا amplicon (PCR المنتج) مطابقة في حجمها للسيطرة PCR وكما تنبأ عن التمهيدي يا أليل تستخدم مجموعات (3) : B – 560bp ، C1 – 340bp ، C2 – 400 سنة مضت ، D1 – 620 سنة مضت ، وغليان E1 – 280. لالعزلات المختبرة مع PCR allelotyping O (الشكل 1A) ، ونحن تعيين O الأليلات ب (الحارات 10 –13) ، C1 (الممرات 7-9) ، C2 (حارات 4 ، 5) ، D1 (حارة 3) ، وE1 (حارة 6) لعزل السالمونيلا ten اختبارها في الممرات 3-12. تم اختبار هذه العزلات السالمونيلا نفسها ، وبنفس الترتيب كما الشكل. 1A ، لالأليلات H1 ط ؛ ز ، ط ، ص ، وZ10 (الشكل 1B ، C). مرة أخرى ، تم تعيين كل أليل H1 إلى عزل تعتمد على وجود تطابق في حجم amplicon لسيطرة PCR وكما تنبأ عن التمهيدي H1 أليل 4 مجموعات المستخدمة (3) : I – 510 سنة مضت (الشكل 1B ، 2 لين ؛) ز ، م BP – 310 (الشكل 1B ، 2 لين) ؛ R – 170 سنة مضت (الشكل 1C ، 2 لين) ، وZ10 – 360 سنة مضت (الشكل 1C ، لين 2). تم تعيين الأليلات H1 إلى واحد من عزل السالمونيلا عشرة : ط — يعزل 3 و 8 (الشكل 1B ، الممرات 5 و 10) ؛ ز ، ط ، 1 و 5 يعزل (الشكل 1B ، الممرات 3 و 7) ، ص إلى وكان ليعزل Z10 2 و 7 و 10 (الشكل 1C ، الممرات 4 ، 9 ، و 12) عزل السالمونيلا 4 سلبية على الأليلات H1 four اختبار ؛ يعزل 6 و 9 (الشكل 1C ، الممرات 8 و 11). أخيرا ، تم اختبار السالمونيلا المعزولة بواسطة PCR لالأليلات H2 المرتبطة 1،2 ؛ 1،5 ؛ 1،6 ؛ 1،7 معقدة والمستضد ه ، ن ، س ، ه ، ن ، z15 معقد مستضد. التمهيدي للمجموعات H2 1،2 ؛ 1،5 ؛ 1،6 ؛ 1،7 معقدة وH2 ه ، ن ، س ، ه ، ن ، z15 معقدة تنتج 290 و 150 سنة مضت amplicons غليان ، على التوالي (3). يمكن للمجموعات التمهيدي لا يميز محددة الأليلات H2 H2 المستضد إما داخل مجمع لتعيين نوع أليل نهائية السابقين. 1،2 ، إلى عزل (3) السالمونيلا المعزولة 4 ، 6 ، 8-10 كانت ايجابية للالأليلات H2 H2 المرتبطة 1،2 ؛ 1،5 ؛ 1،6 ؛ 1،7 مستضد معقدة ، في حين يعزل 2 و وكانت ايجابية لل7 الأليلات H2 المرتبطة ه ، ن ، س ، ه ، ن ، z15 معقدة مستضد (لا تظهر البيانات). في حين السالمونيلا المعزولة 1 و 3 و 5 كانت سلبية بالنسبة للمجمعات two مستضد H2 ، يعزل فقط 1 و 5 وكانت سلبية بالنسبة للفلاجيلين H2 ، على النحو المحدد باستخدام عامة H2 فلاجيلين PCR (1) (لا تظهر البيانات). وتتلخص هذه النتائج في الجدول رقم 2 مع ضرب مصلي السالمونيلا المفترض المخصصة لكل عزل. الشكل 1. PCR متعددة لتحديد النوعية والأليلات O H المرتبطين مع س. enterica Serovars الملهبة ، الهدار ، هايدلبرغ ، والتيفية الفأرية (A) ملتيبليكس يا أليل PCR. (B ، C) ملتيبليكس أليل H1 PCR لتحديد جمع أليل فلاجيلين : ط / ز ، م (B) وr/z10 (C). حارات 1and 13 : 100 سنة مضت سلم (Promega ؛ ماديسون ، ويسكونسن) ، 2 لين : ضوابط متعددة لPCR الأليلات O B ، C1 ، C2 ، D1 ، و E (A) ، الأليلات H1 ط / ز ، م (B) ، و الأليلات H1 r/z10 (C) ، والممرات 3-12 : السالمونيلا المعزولة 1-10 (الجدول 2). PCR ماجستير ميكس Thermocycler (Rapidcycler) الكواشف تكوين / تركيز مبلغ   المعلمات الحجم المتوقع H1 ط / ز ، م DH 2 O 63 ميكرولتر البرنامج 1 94 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة 10X PCR العازلة 20 ملي MgCl 2 10 ميكرولتر البرنامج 2 94 درجة مئوية لمدة 1 ثانية 500 mMTris pH8 55 درجة مئوية لمدة 1 ثانية 2.5 ملغ / مل BSA 72 درجة مئوية لمدة 20 ق 5 ٪ Ficoll 400 دورات لمدة 40 10 mMTartrazine منحدر = 2.0 ط التمهيدي (و) * AACGAAATCAACAACAACCTGC 2 ميكرولتر البرنامج 3 72 درجة مئوية لمدة 4 دقائق 510 سنة مضت ط التمهيدي (ص) * TAGCCATCTTTACCAGTTCCC 2 ميكرولتر التمهيدي ز ، م (و) * GCAGCAGCACCGGATAAAG 2 ميكرولتر 310 سنة مضت التمهيدي ز ، م (ص) * CATTAACATCCGTCGCGCTAG 2 ميكرولتر DMSO 5 ميكرولتر dNTP 10 ملي 2 ميكرولتر طق 5 وحدات / ميكرولتر 2 ميكرولتر 90 ميكرولتر H1 ص / ض 10 DH 2 O 55 ميكرولتر البرنامج 1 94 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة 10X PCR العازلة 30 ملم MgCl 2 10 ميكرولتر البرنامج 2 94 درجة مئوية لمدة 1 ثانية 500 mMTris pH8 55 درجة مئوية لمدة 1 ثانية 2.5 ملغ / مل BSA 72 درجة مئوية لمدة 20 ق 5 ٪ Ficoll 400 دورات لمدة 40 10 mMTartrazine منحدر = 2.0 التمهيدي ص (و) * CCTGCTATTACTGGTGATC 4μl البرنامج 3 72 درجة مئوية لمدة 4 دقائق 170 سنة مضت التمهيدي ص (ص) * GTTGAAGGGAAGCCAGCAG 4μl التمهيدي ض 10 (و) * GCACTGGCGTTACTCAATCTC 4μl 360 سنة مضت ض التمهيدي 10 (ص) * GCATCAGCAATACCACTCGC 4μl DMSO 5 ميكرولتر dNTP 10 ملي 2 ميكرولتر طق 5 وحدات / ميكرولتر 2 ميكرولتر 90 ميكرولتر PCR ماجستير ميكس Thermocycler (Rapidcycler) الكواشف تكوين / تركيز مبلغ   المعلمات الحجم المتوقع H2 1،2 / ه ، ن ، س DH 2 O 63.6 ميكرولتر البرنامج 1 94 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة 10X PCR العازلة 20 ملي MgCl 2 10 ميكرولتر البرنامج 2 94 درجة مئوية لمدة 1 ثانية 500 mMTris pH8 55 درجة مئوية لمدة 1 ثانية 2.5 ملغ / مل BSA 72 درجة مئوية لمدة 20 ق 5 ٪ Ficoll 400 دورات لمدة 40 10 mMTartrazine منحدر = 2.0 1،2 التمهيدي (و) * AGAAAGCGTATGATGTGAAA 2 ميكرولتر البرنامج 3 72 درجة مئوية لمدة 4 دقائق 290 سنة مضت 1،2 التمهيدي (ص) * ATTGTGGTTTTAGTTGCGCC 2 ميكرولتر ه التمهيدي ، ن ، س (و) * TAACTGGCGATACATTGACTG 2 ميكرولتر 150 سنة مضت التمهيدي ه ، ن ، س (ص) 1 TAGCACCGAATGATACAGCC 2 ميكرولتر DMSO 5 ميكرولتر dNTP 10 ملي 2 ميكرولتر طق 5 وحدات / ميكرولتر 2 ميكرولتر 90 ميكرولتر عام H2 DH 2 O 72 ميكرولتر البرنامج 1 94 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة 10X PCR العازلة 30 ملم MgCl 2 10 ميكرولتر البرنامج 2 94 درجة مئوية لمدة 10 ثانية 500 mMTris pH8 45 درجة مئوية لمدة 10 ثانية 2.5 ملغ / مل BSA 72 درجة مئوية لمدة 35 ق 5 ٪ Ficoll 400 دورات لمدة 40 10 mMTartrazine منحدر = 2.0 fljB التمهيدي (و) * CAAGTAATCAACACTAACAGTC 2 ميكرولتر البرنامج 3 72 درجة مئوية لمدة 4 دقائق 1500 سنة مضت fljB التمهيدي (ص) * TTAACGTAACAGAGACAGCAC 2 ميكرولتر dNTP 10 ملي 2 ميكرولتر طق 5 وحدات / ميكرولتر 2 ميكرولتر 90 ميكرولتر الجدول 1. بروتوكول للالسالمونيلا flagellinallelotyping PCR : تكوينه وشروط ، والنتائج المتوقعة. * تركيز العمل في البورصة الاشعال قليل النوكليوتيد PCR هو 25 ميكرومتر عزل يا أليل H1 أليل H2 أليل ضرب مصلي   B C1 C2 D1 E أنا ز ، م ص Z10 1،2 ؛ 1،5 ؛ 1،6 ؛ 1،7 ه ، ن ، س ، ه ، ن ، z15 عام 1   1 — — — + — — + — — — — — الملهبة 2 — — + — — — — — + — + + الهدار / اسطنبول 3 3 — — + — — + — — — — — + كنتاكي 4 — — — — + — — — — + — + غير معروف 5 — + — — — — + — — — — — مونتيفيديو 6 — + — — — — — + — + — + الطفلية أو فيرخوف 2 7 — + — — — — — — + — + + مبانداكا 8 + — — — — + — — — + — + التيفية الفأرية 9 + — — — — — — + — + — </td> + هايدلبرغ 10 + — — — — — — — + + — + هيفاء الجدول 2. Allelotyping نتائج PCR (الشكل 1) والسالمونيلا وبناء على تسمية ضرب مصلي تحديد O ، H1 ، H2 والأليلات > 1 H2 PCR تنتج 1.5 كيلوبايت amplicon لجميع السالمونيلا امتلاك H2 فلاجيلين ، بغض النظر عن H2 أليل (1). ويستخدم هذا PCR لتمييز حيد الطور من السالمونيلا ثنائي الطور. (2) يمكن H2 PCR متعددة لا يميز بين الأليلات مختلفة لH2 1،2 ؛ 1،5 ؛ 1،6 ؛ 1،7 معقدة مستضد (3). 3 تحويل بالعاثية س. enterica ضرب مصلي هدار يغير المستضد O LPS لإنتاج ضرب مصلي اسطنبول. يمكن للallelotyping O PCR لا نستشف هذه التغيرات الجينية خفية / مستضدي. ضرب مصلي 1 يا أليل H1 أليل H2 أليل   B C1 C2 D1 E أنا ز ، م ص Z10 1،2 ؛ 1،5 ؛ 1،6 ؛ 1،7 ه ، ن ، س ، ه ، ن ، z15 عامة 2 كاليفورنيا + — — — — — + — — — — — التيفية الفأرية + — — — — + — — — + — + هايدلبرغ + — — — — — — + — + — + هيفاء + — — — — — — — + + — + مونتيفيديو — + — — — — + — — + — + Othmarschen — + — — — — + — — — — — Athinai — + — — — + — — — — + + Papuana — + — — — — — + — — + + مبانداكا — + — — — — — — + — + + Chincol — — + — — — + — — — + + كنتاكي — — + — — + — — — — — + الهدار / اسطنبول 3 — — + — — — — — + — + + الملهبة — — — + — — + — — — — — سيريمبان — — — + — + — — — + — + Campinense — — — + — — — + — — + + لومي — — — + — — — + — — — + بورتلاند — — — + — — — — + + — + Ruanda — — — + — — — — + — + + TREGUIER — — — + — — — — + — — + سيمي — — — — + — — + — — + + Weltevreden — — — — + — — + — — — + Kristianstad — — — — + — — — + — + + بيافرا — — — — + — — — + — — + الجدول 3. السالمونيلا Serovars enterica المحددة من قبل PCR Allelotyping (1) أبرزت في serovars جريئة هي الأكثر شيوعا التي يواجهها التشخيص أو الطعام المختبر الميكروبيولوجي. 2 H2 PCR تنتج 1.5 كيلوبايت amplicon لجميع السالمونيلا امتلاك H2 فلاجيلين ، بغض النظر عن H2 أليل (1). ويستخدم هذا PCR لتمييز حيد الطور من السالمونيلا ثنائي الطور. 3 تحويل بالعاثية س. enterica ضرب مصلي هدار يغير المستضد O LPS لإنتاج ضرب مصلي اسطنبول. يمكن للallelotyping O PCR لا نستشف هذه التغيرات الجينية خفية / مستضدي.