Inyección de sangre autóloga al modelo hemorragia intracerebral espontánea en ratones
Summary
El modelo de inyección de sangre autóloga de la hemorragia intracerebral en ratones descritos en este protocolo se utiliza la técnica de doble inyección para minimizar el riesgo de reflujo de sangre hasta el trayecto de la aguja, no los anticoagulantes en el sistema de bombeo, y elimina todo el espacio muerto y el tubo extensible en el sistema.
Abstract
Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model. While ICH accounts for 10-15% of all strokes, there remains no specific effective therapy. The autologous blood injection model in mice involves the stereotaxic injection of arterial blood into the basal ganglia mimicking a spontaneous hypertensive hemorrhage in man. The response to hemorrhage can then be studied in vivo and the neurobehavioral deficits quantified, allowing for description of the ensuing pathology and the testing of potential therapeutic agents. The procedure described in this protocol uses the double injection technique to minimize risk of blood reflux up the needle track, no anticoagulants in the pumping system, and eliminates all dead space and expandable tubing in the system.
Protocol
Discussion
Este modelo quirúrgico de la hemorragia intracerebral en ratones utilizando autólogo cola resultados sanguíneo de la arteria en un modelo reproducible de la hemorragia espontánea ganglios basales. Un modelo en ratones ICH ofrece la ventaja de la disponibilidad de animales transgénicos para investigar la fisiopatología, sin embargo, su pequeño tamaño hace que los procedimientos neuroquirúrgicos técnicamente más difícil que en los animales más grandes.
El modelo de la colagenasa y…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
El trabajo fue financiado por una beca del Instituto de Medicina Traslacional y Terapéutica, y una beca de formación del Instituto de Medicina e Ingeniería (T32HL007954) de la Universidad de Pennsylvania y la Marlene L. Cohen y Jerome H. Fleisch Académico Grant en la Universidad de Connecticut Health Center (LHS) y NIH NS-029331 (FAW).
Materials
Stereotaxic frame for mouse neurosurgery (Stoelting, 51925)
Microinfusion pump and processor (UMP-3 and Micro4, World Precision Instruments, Sarasota, FL)
Mouse warmer (Stoelting, 50300)
Inhalational mouse anesthesia (Braintree Scientific, EZ-AF9000)
25 μL gastight borosilicate Hamilton syringe with coated plunger and no needle
(Hamilton company, Reno, NV, 1702RN syringe: 765401, ferrule: 30949, spacer: 30946)
fused silica needle cut to 2 cm length (Hamilton, 17739)
*note Hamilton syringe and fused silica needle may be reused for multiple surgeries if sterilized prior to each surgery. These materials are crucial to avoid blood clotting.
Sterile surgical gloves
Surgical gown, bonnet and mask
Betadine
75% ethanol
sterile 27 g needle (single use)
sterile 1 cc syringe (single use)
sterile surgical blade
Cidex
sterile water
buprenorphine and isoflurane
sterile gauze
paraffin wax paper squares
Veterinary surgical glue (Vetbond, 3M, St. Paul, MN)
References
- Hua, Y., Schallert, T., Keep, R. F., Wu, J., Hoff, J. T., Xi, G. Behavioral Tests After Intracerebral Hemorrhage in the Rat. Stroke. 33, 2478-2484 (2002).
- James, M., Warner, D., Laskowitz, D. Preclinical Models of Intracerebral Hemorrhage: A Translational Perspective. Neurocritical Care. 9, 139-152 (2008).
- Foerch, C., Arai, K., Jin, G., Park, K. -. P., Pallast, S., van Leyen, K., Lo, E. H. Experimental Model of Warfarin-Associated Intracerebral Hemorrhage. Stroke. 39, 3397-3404 (2008).
- Nakamura, T., Xi, G., Hua, Y., Schallert, T., Hoff, J. T., Keep, R. F. Intracerebral hemorrhage in mice: model characterization and application for genetically modified mice. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 24, 487-494 (2004).
- Rynkowski, M. A., Kim, G. H., Komotar, R. J., Otten, M. L., Ducruet, A. F., Zacharia, B. E., Kellner, C. P., Hahn, D. K., Merkow, M. B., Garrett, M. C. A mouse model of intracerebral hemorrhage using autologous blood infusion. Nat. Protocols. 3, 122-128 (2008).
- Wang, J., Fields, J., Doré, S. The development of an improved preclinical mouse model of intracerebral hemorrhage using double infusion of autologous whole blood. Brain Research. 1222, 214-221 (2008).
- Zhao, X., Sun, G., Zhang, J., Strong, R., Song, W., Gonzales, N., Grotta, J. C., Aronowski, J. Hematoma resolution as a target for intracerebral hemorrhage treatment: Role for peroxisome proliferator-activated receptor γ in microglia/macrophages. Annals of Neurology. 61, 352-362 (2007).
