حقن الدم ذاتي النزيف الدماغي الداخلي النموذجي لالعفوي في الفئران
Summary
حقن الدم الذاتي نموذج نزيف داخل المخ في الفئران الموصوفة في هذا البروتوكول يستخدم تقنية الحقن المزدوج لتقليل خطر ارتداد الدم تصل المسار الإبرة ، أي مضادات التخثر في نظام الضخ ، ويزيل كل المساحة الميتة والأنابيب القابلة للتوسيع في النظام.
Abstract
Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model. While ICH accounts for 10-15% of all strokes, there remains no specific effective therapy. The autologous blood injection model in mice involves the stereotaxic injection of arterial blood into the basal ganglia mimicking a spontaneous hypertensive hemorrhage in man. The response to hemorrhage can then be studied in vivo and the neurobehavioral deficits quantified, allowing for description of the ensuing pathology and the testing of potential therapeutic agents. The procedure described in this protocol uses the double injection technique to minimize risk of blood reflux up the needle track, no anticoagulants in the pumping system, and eliminates all dead space and expandable tubing in the system.
Protocol
Discussion
هذا النموذج من نزيف داخل المخ جراحية في الفئران باستخدام ذاتي النتائج الدم في الشريان الذيل نموذجا استنساخه من النزف العفوي العقد القاعدية. نموذج ICH في الفئران تقدم ميزة توافر الحيوانات المعدلة وراثيا للتحقيق في الفيزيولوجيا المرضية ، ولكن صغر حجمها يجعل إجراءات جر…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وتم تمويل العمل على زمالة من معهد للطب والعلاج بالحركة ، ومنحة تدريبية من معهد للطب والهندسة (T32HL007954) في جامعة ولاية بنسلفانيا ولام كوهين مارلين وجيروم H. Fleisch منح الباحث في جامعة كونيتيكت مركز صحي (LHS) ، والمعاهد الوطنية للصحة NS – 029331 (فاو).
Materials
Stereotaxic frame for mouse neurosurgery (Stoelting, 51925)
Microinfusion pump and processor (UMP-3 and Micro4, World Precision Instruments, Sarasota, FL)
Mouse warmer (Stoelting, 50300)
Inhalational mouse anesthesia (Braintree Scientific, EZ-AF9000)
25 μL gastight borosilicate Hamilton syringe with coated plunger and no needle
(Hamilton company, Reno, NV, 1702RN syringe: 765401, ferrule: 30949, spacer: 30946)
fused silica needle cut to 2 cm length (Hamilton, 17739)
*note Hamilton syringe and fused silica needle may be reused for multiple surgeries if sterilized prior to each surgery. These materials are crucial to avoid blood clotting.
Sterile surgical gloves
Surgical gown, bonnet and mask
Betadine
75% ethanol
sterile 27 g needle (single use)
sterile 1 cc syringe (single use)
sterile surgical blade
Cidex
sterile water
buprenorphine and isoflurane
sterile gauze
paraffin wax paper squares
Veterinary surgical glue (Vetbond, 3M, St. Paul, MN)
References
- Hua, Y., Schallert, T., Keep, R. F., Wu, J., Hoff, J. T., Xi, G. Behavioral Tests After Intracerebral Hemorrhage in the Rat. Stroke. 33, 2478-2484 (2002).
- James, M., Warner, D., Laskowitz, D. Preclinical Models of Intracerebral Hemorrhage: A Translational Perspective. Neurocritical Care. 9, 139-152 (2008).
- Foerch, C., Arai, K., Jin, G., Park, K. -. P., Pallast, S., van Leyen, K., Lo, E. H. Experimental Model of Warfarin-Associated Intracerebral Hemorrhage. Stroke. 39, 3397-3404 (2008).
- Nakamura, T., Xi, G., Hua, Y., Schallert, T., Hoff, J. T., Keep, R. F. Intracerebral hemorrhage in mice: model characterization and application for genetically modified mice. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 24, 487-494 (2004).
- Rynkowski, M. A., Kim, G. H., Komotar, R. J., Otten, M. L., Ducruet, A. F., Zacharia, B. E., Kellner, C. P., Hahn, D. K., Merkow, M. B., Garrett, M. C. A mouse model of intracerebral hemorrhage using autologous blood infusion. Nat. Protocols. 3, 122-128 (2008).
- Wang, J., Fields, J., Doré, S. The development of an improved preclinical mouse model of intracerebral hemorrhage using double infusion of autologous whole blood. Brain Research. 1222, 214-221 (2008).
- Zhao, X., Sun, G., Zhang, J., Strong, R., Song, W., Gonzales, N., Grotta, J. C., Aronowski, J. Hematoma resolution as a target for intracerebral hemorrhage treatment: Role for peroxisome proliferator-activated receptor γ in microglia/macrophages. Annals of Neurology. 61, 352-362 (2007).
