Summary

マウスにおける自発脳内出血をモデル化する自家血注入

Published: August 24, 2011
doi:

Summary

このプロトコルで説明されているマウスの脳内出血の自家血注入モデルでは、針のトラックまでの血液逆流、ポンプシステムにおける無抗凝固剤のリスクを最小限に抑えるために二重注入の技術を使用し、システム内のすべてのデッドスペースと拡張可能なチューブを排除。

Abstract

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model. While ICH accounts for 10-15% of all strokes, there remains no specific effective therapy. The autologous blood injection model in mice involves the stereotaxic injection of arterial blood into the basal ganglia mimicking a spontaneous hypertensive hemorrhage in man. The response to hemorrhage can then be studied in vivo and the neurobehavioral deficits quantified, allowing for description of the ensuing pathology and the testing of potential therapeutic agents. The procedure described in this protocol uses the double injection technique to minimize risk of blood reflux up the needle track, no anticoagulants in the pumping system, and eliminates all dead space and expandable tubing in the system.

Protocol

1。機器の準備細菌汚染を最小限に抑えるために75%エタノールで定位フレームとポンプを拭う。 ハミルトンシリンジとフューズドシリカニードルを滅菌する。 注:化学物質の滅菌が使用されている場合は、使用前に滅菌水で数回洗浄してください。 75%エタノールでパラフィンワックスペーパーの表面を拭き、乾燥させてください。 2。注…

Discussion

自発的な基底核出血の再現可能なモデルで自家尾動脈の血液の結果を使用してマウスの脳内出血のこの外科的モデル。マウスにおけるICHのモデルは、病態生理を調査するためにトランスジェニック動物の可用性の利点を提供しているが、その小さなサイズが大きい動物よりも脳神経外科手術はより技術的に困難になります。

コラゲナーゼのモデルと自家血注入モデルは?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

作業は、トランスレーショナル医学と治療のための研究所からのフェローシップ、およびペンシルベニア大学で医学と工学(T32HL007954)研究所から訓練助成金とマレーネL.コーエンとでジェロームH. Fleisch学者グラントによって資金を供給されたコネチカット大学保健センター(LHS)とNIH NS – 029331(FAW)。

Materials

Stereotaxic frame for mouse neurosurgery (Stoelting, 51925)

Microinfusion pump and processor (UMP-3 and Micro4, World Precision Instruments, Sarasota, FL)

Mouse warmer (Stoelting, 50300)

Inhalational mouse anesthesia (Braintree Scientific, EZ-AF9000)

25 μL gastight borosilicate Hamilton syringe with coated plunger and no needle

(Hamilton company, Reno, NV, 1702RN syringe: 765401, ferrule: 30949, spacer: 30946)

fused silica needle cut to 2 cm length (Hamilton, 17739)
*note Hamilton syringe and fused silica needle may be reused for multiple surgeries if sterilized prior to each surgery. These materials are crucial to avoid blood clotting.

Sterile surgical gloves

Surgical gown, bonnet and mask

Betadine

75% ethanol

sterile 27 g needle (single use)

sterile 1 cc syringe (single use)

sterile surgical blade

Cidex

sterile water

buprenorphine and isoflurane

sterile gauze

paraffin wax paper squares

Veterinary surgical glue (Vetbond, 3M, St. Paul, MN)

References

  1. Hua, Y., Schallert, T., Keep, R. F., Wu, J., Hoff, J. T., Xi, G. Behavioral Tests After Intracerebral Hemorrhage in the Rat. Stroke. 33, 2478-2484 (2002).
  2. James, M., Warner, D., Laskowitz, D. Preclinical Models of Intracerebral Hemorrhage: A Translational Perspective. Neurocritical Care. 9, 139-152 (2008).
  3. Foerch, C., Arai, K., Jin, G., Park, K. -. P., Pallast, S., van Leyen, K., Lo, E. H. Experimental Model of Warfarin-Associated Intracerebral Hemorrhage. Stroke. 39, 3397-3404 (2008).
  4. Nakamura, T., Xi, G., Hua, Y., Schallert, T., Hoff, J. T., Keep, R. F. Intracerebral hemorrhage in mice: model characterization and application for genetically modified mice. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 24, 487-494 (2004).
  5. Rynkowski, M. A., Kim, G. H., Komotar, R. J., Otten, M. L., Ducruet, A. F., Zacharia, B. E., Kellner, C. P., Hahn, D. K., Merkow, M. B., Garrett, M. C. A mouse model of intracerebral hemorrhage using autologous blood infusion. Nat. Protocols. 3, 122-128 (2008).
  6. Wang, J., Fields, J., Doré, S. The development of an improved preclinical mouse model of intracerebral hemorrhage using double infusion of autologous whole blood. Brain Research. 1222, 214-221 (2008).
  7. Zhao, X., Sun, G., Zhang, J., Strong, R., Song, W., Gonzales, N., Grotta, J. C., Aronowski, J. Hematoma resolution as a target for intracerebral hemorrhage treatment: Role for peroxisome proliferator-activated receptor γ in microglia/macrophages. Annals of Neurology. 61, 352-362 (2007).

Play Video

Cite This Article
Sansing, L. H., Kasner, S. E., McCullough, L., Agarwal, P., Welsh, F. A., Kariko, K. Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice. J. Vis. Exp. (54), e2618, doi:10.3791/2618 (2011).

View Video