نحن تصف طريقة بسيطة وسريعة وقوية لتشكيل<em> المبيضات البيض</em> الأغشية الحيوية باستخدام 96 لوحات microtiter جيدا وفائدتها في اختبار قابلية مضاد للخلايا داخل الأغشية الحيوية.
المبيضات البيض يظل السبب الأكثر شيوعا للالتهابات فطرية في زيادة عدد السكان من المرضى للخطر والمبيضات الآن هو الثالث الأكثر شيوعا العدوى في المستشفيات في الولايات المتحدة. وترتبط مظاهر مختلفة من المبيضات مع تشكيل بيوفيلم ، سواء على أنسجة المضيف و / أو الأجهزة الطبية (القسطرة أي). تشكيل بيوفيلم دلالات سلبية السريرية ، ومحمية داخل خلايا الأغشية الحيوية من الاستجابات المناعية والمضيف من عمل مضادات الفطريات. وقد طورنا نموذجا بسيطا وسريعا وقويا في المختبر لتشكيل C. الأغشية الحيوية albicans به جيدا microtiter 96 لوحات ، والتي يمكن أن تستخدم أيضا لاختبار قابلية بيوفيلم مضاد. قراءات من هذا الاختبار هو اللونية ، على أساس الحد من XTT (أ tetrazolium الملح) بواسطة عملية الأيض نشطة بيوفيلم الخلايا الفطرية. تجربة نموذجية تأخذ ما يقرب من 24 ساعة لتشكيل بيوفيلم ، مع 24 ساعة إضافية لاختبار الحساسية المضادة للفطريات. بسبب بساطتها واستخدام المواد المتوفرة عادة المختبرات والمعدات ، وهذه التقنية نظاما ديمقراطيا البحوث بيوفيلم ويمثل خطوة مهمة نحو توحيد اختبار الحساسية من الفطريات الأغشية الفطرية.
نحن هنا وصف بسيط وسريع والاقتصادية واستنساخه غاية 96 لوحة microtiter نموذج جيد لتشكيل الأغشية الحيوية المبيضات مقرونا اللونية الأسلوب الذي يقيس النشاطات الأيضية من الخلايا داخل بيوفيلم XTT به. وقد تم تطوير هذا الأصل 96 لوحة microtiter كذلك نموذجا لتشكيل بيوفيلم لجيم وي…
The authors have nothing to disclose.
ويتم تمويل بيوفيلم ذات الصلة العمل في المختبر من المنح ومرقمة R21DE017294 R21AI080930 من المعهد الوطني لأبحاث طب الأسنان والجمجمة ، والمعهد الوطني للحساسية والأمراض المعدية (لJLL – R). المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للNIDCR ، NIAID أو في المعاهد الوطنية للصحة.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Sabouraud-dextrose agar | Becton Dickinson | 211584 | To prepare plates for fresh subcultures of fungal isolates | |
YPD: Yeast peptone dextrose | US Biological | Y2076 | Medium for propagation of overnight liquid cultures | |
RPMI-1640 without sodium bicarbonate supplemented with L-glutamine | Cellgro | 50-020-PB | Liquid medium for biofilm formation | |
Morpholinepropanesulfonic acid (MOPS) | Fisher | BP308 | To buffer RPMI 1640 | |
Phosphate buffered saline, PBS | Sigma | P4417 | Buffer for washes | |
XTT sodium salt | Sigma | X4251 | See above for preparation instructions | |
Ringer’s lactate | Hospira | NDC0409-7953-09 | For preparation of XTT solution | |
Menadione | Sigma | M5625 | Caution: hazardous by skin contact, inhalation or ingestion | |
Petri dishes | Fisher | 08-757-12 | ||
15 ml conical centrifuge tubes | Corning | 430790 | ||
50 ml conical centrifuge tubes | Corning | 430828 | ||
96 well microtiter plates: Polystyrene, flat-bottomed, tissue culture treated | Corning | 3595 | ||
Multichannel pipette and tips | Eppendorf | |||
Incubator | Any | |||
Microtiter plate reader | Any |