Descriviamo un metodo semplice, rapido e robusto per la formazione di<em> Candida albicans</em> Biofilm su 96 micropiastre bene e la sua utilità nei test di suscettibilità antifungina di cellule all'interno di biofilm.
Candida albicans rimane la causa più frequente di infezioni fungine in una popolazione in espansione di pazienti compromessi e candidosi è ora la terza più comune infezione negli ospedali degli Stati Uniti. Diverse manifestazioni della candidiasi sono associati con la formazione di biofilm, sia su tessuti dell'ospite e / o dispositivi medici (cateteri per esempio). Formazione di biofilm svolge negative implicazioni cliniche, come le cellule all'interno del biofilm sono protetti dalla risposta immunitaria e dall'azione di antimicotici. Abbiamo sviluppato un modello semplice, veloce e robusto in vitro per la formazione di C. biofilm albicans con 96 pozzetti per microtitolazione piastre, che può anche essere utilizzato per test di suscettibilità biofilm antimicotico. La lettura di questo saggio è colorimetrico, basato sulla riduzione delle XTT (un sale di tetrazolio) da cellule metabolicamente attive biofilm fungine. Un tipico esperimento dura circa 24 ore per la formazione di biofilm, con ulteriori 24 ore per i test di suscettibilità antifungina. A causa della sua semplicità e l'utilizzo di materiali di laboratorio e attrezzature comunemente disponibili, questa tecnica democratizza ricerca biofilm e rappresenta un passo importante verso la standardizzazione dei test di suscettibilità antifungina di biofilm fungine.
Qui si descrive un semplice, rapido, economico e altamente riproducibili 96 pozzetti modello micropiastre per la formazione di biofilm Candida accoppiato con un metodo colorimetrico che misura l'attività metabolica delle cellule all'interno del biofilm utilizzando XTT. Questo modello ben 96 micropiastre per la formazione di biofilm è stato originariamente sviluppato per C. albicans ma può essere utilizzato per altre Candida spp. e facilmente adattato per altri organismi fungini. Il …
The authors have nothing to disclose.
Biofilm attività relative al laboratorio è finanziata da sovvenzioni numerati R21DE017294 e R21AI080930 dal National Institute of Dental Research & cranio-facciali e l'Istituto nazionale per le allergie e malattie infettive (a JLL-R.). I contenuti sono di esclusiva responsabilità degli autori e non rappresentano necessariamente il punto di vista ufficiale della NIDCR, il NIAID o il NIH.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Sabouraud-dextrose agar | Becton Dickinson | 211584 | To prepare plates for fresh subcultures of fungal isolates | |
YPD: Yeast peptone dextrose | US Biological | Y2076 | Medium for propagation of overnight liquid cultures | |
RPMI-1640 without sodium bicarbonate supplemented with L-glutamine | Cellgro | 50-020-PB | Liquid medium for biofilm formation | |
Morpholinepropanesulfonic acid (MOPS) | Fisher | BP308 | To buffer RPMI 1640 | |
Phosphate buffered saline, PBS | Sigma | P4417 | Buffer for washes | |
XTT sodium salt | Sigma | X4251 | See above for preparation instructions | |
Ringer’s lactate | Hospira | NDC0409-7953-09 | For preparation of XTT solution | |
Menadione | Sigma | M5625 | Caution: hazardous by skin contact, inhalation or ingestion | |
Petri dishes | Fisher | 08-757-12 | ||
15 ml conical centrifuge tubes | Corning | 430790 | ||
50 ml conical centrifuge tubes | Corning | 430828 | ||
96 well microtiter plates: Polystyrene, flat-bottomed, tissue culture treated | Corning | 3595 | ||
Multichannel pipette and tips | Eppendorf | |||
Incubator | Any | |||
Microtiter plate reader | Any |