Medulloblastom Hücre bağışıklık Fare İntrakranial Ortotopik Allografting
Summary
Bu protokol, fare medulloblastom doku izolasyon ve ayrılma açıklar ve ikincil medulloblastom başlatmak için immün sistemi baskılanmış alıcı farelere tümör hücrelerinin sonraki allografting.
Abstract
Medulloblastom, sinir sistemi, en sık görülen pediatrik tümördür. Hayvan çalışmalarında büyük bir vücut medulloblastom 1-4 hücre kökenli olarak serebellar granül nöron öncüleri (CGNPs) odaklanmıştır. Ancak, insan hasta (nodüler desmoplastik, klasik ve hücre / anaplastik büyük) ve medulloblastom ektopik CGNP işaretleyici 5 herhangi bir ifade ile insan hastaların bir alt kümesi bulundu olduğu gerçeğini, medulloblastom alt tiplerinin farklı klinik sunumlar öneririz. medulloblastom hücresel ve moleküler kökenleri, çok daha karmaşık ve tamamen deşifre. Bu nedenle, hücre tipi özel bir tedavi yöntemi geliştirdi dayalı alternatif medulloblastom tümör hücre-kökenli olup olmadığını belirlemek için esastır. Bu amaçla, alıcıların ikincil tümör gelişiminin sonraki analizlerde takip genetik olarak işaretlenmiş tümör hücre tiplerinin allografting intrakranial tümör başlatan hücreleri hücresel kökenli ortotopik belirlenmesini sağlayacaktır. Burada intrakranial ortotopik medulloblastom primer tümör dokusundan elde edilen hücreler, allografting için deney protokolünde tanımlamak ve bu prosedür de kurulan hücre hatları hücrelerin nakli için kullanılabilir.
Protocol
Discussion
Verim ikincil tümör oluşumu aşağıdaki gibidir allografting başarılı medulloblastom hücre sağlamak için birkaç kritik faktörler: Birincisi, sadece doku disosiasyon için% 50 Accutase kullanımı ve uzun süreli enzim tedavisi hücre canlılığını anlamlı bir azalma yol olarak doku üzerinde sindirimi yoktur. Ayrıca sadece 1 mL boyutu Pipetman küçük ipuçları da ayrışmış hücreleri fiziksel hasar oluşturabilir kullanın. Allografting için tek hücreler ve küçük agrega karışımı ince. İk…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışmada, Vanderbilt-Ingram Kanser Merkezi Destek Hibe (P30 CA068485), Çocukluk Çağı Beyin Tümörü Vakfı ve Ulusal Sağlık Enstitüsü (NS042205) hibe ile desteklendi.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Neurobasal medium | Invitrogen | 21103049 | ||
| hEGF | Invitrogen | PHG0311 | 25ng/ml | |
| bFGF | Invitrogen | PHG0023 | 25ng/ml | |
| N2 | Invitrogen | 17502048 | 1X | |
| B27(-RA) | Invitrogen | 12587010 | 1X | |
| Accutase | Invitrogen | A1110501 | 50% | |
| Glutamine | Invitrogen | 25030081 | 2mM | |
| Stereotaxic instrument | Stoelting | 51730 | ||
| Foredom flexible shaft drill, hang-up style | Stoelting | 58650 | ||
| Large probe holder | Stoelting | 51633 | ||
| 10 μL syringe, 26 ga., bevel tip | Stoelting | 51105 | ||
| Drill bit .75mm | Stoelting | 51455-3 |
References
- Schuller, U. Acquisition of granule neuron precursor identity is a critical determinant of progenitor cell competence to form Shh-induced medulloblastoma. Cancer Cell. 14, 123-134 (2008).
- Yang, Z. J. Medulloblastoma can be initiated by deletion of Patched in lineage-restricted progenitors or stem cells. Cancer Cell. 14, 135-145 (2008).
- Kessler, J. D. N-myc alters the fate of preneoplastic cells in a mouse model of medulloblastoma. Genes Dev. 23, 157-170 (2009).
- Flora, A., Klisch, T. J., Schuster, G., Zoghbi, H. Y., Y, H. Deletion of Atoh1 disrupts Sonic Hedgehog signaling in the developing cerebellum and prevents medulloblastoma. Science. 326, 1424-1427 (2009).
- Salsano, E. Expression of the neurogenic basic helix-loop-helix transcription factor NEUROG1 identifies a subgroup of medulloblastomas not expressing ATOH1. Neuro Oncol. 9, 298-307 (2007).
