Внутричерепное Ортотопическая аллотрансплантации медуллобластомы Ячейки в ослабленной иммунной системой Мыши
Summary
Этот протокол описывает изоляции и распада тканей медуллобластомой мыши и последующем аллотрансплантации опухолевых клеток в иммунитетом мышей трансплантации, с тем чтобы начать вторичные медуллобластомой.
Abstract
Медуллобластомой является наиболее распространенным педиатрической опухоли нервной системы. Большой объем исследований на животных было сосредоточено на мозжечковой гранул нейрона прекурсоров (CGNPs) в качестве клеточной из-за происхождения медуллобластомой 1-4. Тем не менее, разнообразные клинические проявления медуллобластомой подтипов в человеческом пациентов (узловой, вызывающий развитие фиброзной ткани, классические и большую клетку / анапластическая), а также тот факт, что медуллобластомой находится в подмножество человека пациентов без внематочной выражение CGNP маркер 5, показывают, что клеточном и молекулярном происхождении медуллобластомой являются более сложными и далеко не полностью расшифрован. Поэтому важно определить, есть ли альтернативные опухоли медуллобластомой клеточной от происхождения на основании которых камерного типа конкретной терапевтической модальности могут быть разработаны. С этой целью, внутричерепная ортотопической аллотрансплантации генетически отмеченные типы клеток опухоли с последующим анализом вторичного развития опухоли у реципиентов позволит определения сотовой происхождении опухоли, инициирующие клетки. Здесь мы опишем экспериментальный протокол для внутричерепного ортотопической аллотрансплантации медуллобластомы клетки, полученные из первичной опухоли ткани, и эта процедура может также использоваться для пересадки клетки от установленных клеточных линий.
Protocol
Discussion
Несколько важных факторов для успешного ячейки медуллобластомой аллотрансплантации, что дает вторичное образование опухоли в следующем: Во-первых, использовать только 50% Accutase для ткани диссоциации и не по-дайджест ткани, как длительное лечение фермента приводит к значительному сниже…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Это исследование было поддержано грантами Вандербильт-Инграм онкологический центр поддержки Грант (P30 CA068485), опухоли мозга у детей и Фонд Национальных институтов здравоохранения (NS042205).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Neurobasal medium | Invitrogen | 21103049 | ||
| hEGF | Invitrogen | PHG0311 | 25ng/ml | |
| bFGF | Invitrogen | PHG0023 | 25ng/ml | |
| N2 | Invitrogen | 17502048 | 1X | |
| B27(-RA) | Invitrogen | 12587010 | 1X | |
| Accutase | Invitrogen | A1110501 | 50% | |
| Glutamine | Invitrogen | 25030081 | 2mM | |
| Stereotaxic instrument | Stoelting | 51730 | ||
| Foredom flexible shaft drill, hang-up style | Stoelting | 58650 | ||
| Large probe holder | Stoelting | 51633 | ||
| 10 μL syringe, 26 ga., bevel tip | Stoelting | 51105 | ||
| Drill bit .75mm | Stoelting | 51455-3 |
References
- Schuller, U. Acquisition of granule neuron precursor identity is a critical determinant of progenitor cell competence to form Shh-induced medulloblastoma. Cancer Cell. 14, 123-134 (2008).
- Yang, Z. J. Medulloblastoma can be initiated by deletion of Patched in lineage-restricted progenitors or stem cells. Cancer Cell. 14, 135-145 (2008).
- Kessler, J. D. N-myc alters the fate of preneoplastic cells in a mouse model of medulloblastoma. Genes Dev. 23, 157-170 (2009).
- Flora, A., Klisch, T. J., Schuster, G., Zoghbi, H. Y., Y, H. Deletion of Atoh1 disrupts Sonic Hedgehog signaling in the developing cerebellum and prevents medulloblastoma. Science. 326, 1424-1427 (2009).
- Salsano, E. Expression of the neurogenic basic helix-loop-helix transcription factor NEUROG1 identifies a subgroup of medulloblastomas not expressing ATOH1. Neuro Oncol. 9, 298-307 (2007).
