Intracraniële orthotope Allografting van Medulloblastoom cellen in Immunogecompromitteerde Muizen
Summary
Dit protocol beschrijft de isolatie en dissociatie van de muis medulloblastoom weefsel, en de daaropvolgende allografting van de tumorcellen in immuungecompromitteerde ontvangende muizen in om secundaire medulloblastoom te starten.
Abstract
Medulloblastoom is de meest voorkomende pediatrische tumor van het zenuwstelsel. Een groot deel van onderzoek bij dieren is gericht op het cerebellum granule neuron precursors (CGNPs) als de cel-van-oorsprong voor medulloblastoom 1-4. Echter, de diverse klinische presentaties van medulloblastoom subtypes in menselijke patiënten (nodulair, desmoplastic, klassieke en grote cel / anaplastisch), en het feit dat medulloblastoom is gevonden in een subgroep van de menselijke patiënten zonder ectopische expressie van CGNP marker 5, suggereren dat de cellulaire en moleculaire oorsprong van het medulloblastoom zijn meer complex en lang niet volledig ontcijferd. Daarom is het essentieel om te bepalen of er een alternatief is medulloblastoom tumorcel-van-oorsprong op basis van welke cel-type specifieke therapeutische modaliteit kunnen worden ontwikkeld. Te dien einde zal intracraniële orthotopische allografting van genetisch gemarkeerde tumorcellen soorten, gevolgd door latere analyses van secundaire ontwikkeling van tumoren in de ontvangers laten bepalen van de cellulaire oorsprong van tumor-initiëren cellen. Hier beschrijven we de experimentele protocol voor intracraniële orthotope allografting van medulloblastoom cellen afkomstig van de primaire tumor weefsel, en deze procedure kan ook worden gebruikt voor het transplanteren van cellen van gevestigde cellijnen.
Protocol
Discussion
Een aantal kritische factoren voor een succesvolle medulloblastoom cel allografting dat de rendementen secundaire tumoren ontstaan zijn als volgt te waarborgen: Gebruik eerst slechts 50% Accutase voor weefsel dissociatie en niet over-verteren het weefsel als langdurige enzym behandeling leidt tot een significante vermindering van de levensvatbaarheid van de cellen. Ook gebruik alleen de 1 mL grootte Pipetman als kleinere tips kan genereren ook fysieke schade aan de gedissocieerde cellen. Het is fijn om een m…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit onderzoek werd ondersteund door subsidies van de Vanderbilt-Ingram Cancer Center Support Grant (P30 CA068485), de Childhood Brain Tumor Foundation en het National Institutes of Health (NS042205).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Neurobasal medium | Invitrogen | 21103049 | ||
| hEGF | Invitrogen | PHG0311 | 25ng/ml | |
| bFGF | Invitrogen | PHG0023 | 25ng/ml | |
| N2 | Invitrogen | 17502048 | 1X | |
| B27(-RA) | Invitrogen | 12587010 | 1X | |
| Accutase | Invitrogen | A1110501 | 50% | |
| Glutamine | Invitrogen | 25030081 | 2mM | |
| Stereotaxic instrument | Stoelting | 51730 | ||
| Foredom flexible shaft drill, hang-up style | Stoelting | 58650 | ||
| Large probe holder | Stoelting | 51633 | ||
| 10 μL syringe, 26 ga., bevel tip | Stoelting | 51105 | ||
| Drill bit .75mm | Stoelting | 51455-3 |
References
- Schuller, U. Acquisition of granule neuron precursor identity is a critical determinant of progenitor cell competence to form Shh-induced medulloblastoma. Cancer Cell. 14, 123-134 (2008).
- Yang, Z. J. Medulloblastoma can be initiated by deletion of Patched in lineage-restricted progenitors or stem cells. Cancer Cell. 14, 135-145 (2008).
- Kessler, J. D. N-myc alters the fate of preneoplastic cells in a mouse model of medulloblastoma. Genes Dev. 23, 157-170 (2009).
- Flora, A., Klisch, T. J., Schuster, G., Zoghbi, H. Y., Y, H. Deletion of Atoh1 disrupts Sonic Hedgehog signaling in the developing cerebellum and prevents medulloblastoma. Science. 326, 1424-1427 (2009).
- Salsano, E. Expression of the neurogenic basic helix-loop-helix transcription factor NEUROG1 identifies a subgroup of medulloblastomas not expressing ATOH1. Neuro Oncol. 9, 298-307 (2007).
