مثلي Allografting داخل الجمجمة من خلايا المناعة لدى الفئران نخاعي
Summary
هذا البروتوكول وصف العزلة وتفكك النسيج نخاعي الماوس ، واللاحقة allografting من الخلايا السرطانية في الفئران المناعة المستفيدة من أجل الشروع في نخاعي الثانوية.
Abstract
هو ورم نخاعي الأكثر شيوعا عند الأطفال في الجهاز العصبي. وركزت مجموعة كبيرة من الدراسات على الحيوانات على الخلايا العصبية للدماغ السلائف الحبيبية (CGNPs) ك خلية المنشأ من أجل نخاعي 1-4. ومع ذلك ، فإن العروض المتنوعة السريرية للمرضى في نخاعي فرعية الإنسان (عقيدية ، صلدة ، الكلاسيكية والكبيرة خلية / كشمي) ، وحقيقة أن وجدت في نخاعي مجموعة فرعية من المرضى من البشر مع عدم وجود حمل خارج الرحم من التعبير علامة CGNP 5 ، تشير إلى أن أصول الخلوية والجزيئية لنخاعي هي أكثر تعقيدا وأبعد من أن يفهمها تماما. وبالتالي ، فمن الضروري تحديد ما إذا كان هناك ورم نخاعي بديلة خلية المنشأ على أساس من نوع الخلية التي يمكن تطويرها علاجيا محددة. تحقيقا لهذه الغاية ، سوف مثلي داخل القحف allografting ملحوظ من أنواع الخلايا السرطانية وراثيا تليها تحليلات لاحقة من تطور الورم الثانوي في متلقي تسمح بتحديد منشأ الخلوي للخلايا السرطانية البدء. نحن هنا وصف بروتوكول تجريبي لمثلي داخل القحف allografting من الخلايا المشتقة من نخاعي الأنسجة الورم الرئيسي ، ويمكن أيضا أن تستخدم هذا الإجراء لزرع خلايا من خطوط الخلايا المحددة.
Protocol
Discussion
عدة عوامل حاسمة لضمان نجاح خلية نخاعي allografting أن ينتج تشكيل الورم الثانوية هي على النحو التالي : أولا ، استخدم 50 ٪ فقط Accutase لتفارق الأنسجة وليس الإفراط في هضم الأنسجة والعلاج لفترات طويلة انزيم يؤدي إلى انخفاض كبير في بقاء الخلية. أيضا استخدام فقط Pipetman حجم 1 مل وأصغر نص?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذه الدراسة من المنح المقدمة من فاندربيلت ، انجرام السرطان غرانت مركز الدعم (P30 CA068485) ، واستئصال ورم من الدماغ مؤسسة الطفولة والمعاهد الوطنية للصحة (NS042205).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Neurobasal medium | Invitrogen | 21103049 | ||
| hEGF | Invitrogen | PHG0311 | 25ng/ml | |
| bFGF | Invitrogen | PHG0023 | 25ng/ml | |
| N2 | Invitrogen | 17502048 | 1X | |
| B27(-RA) | Invitrogen | 12587010 | 1X | |
| Accutase | Invitrogen | A1110501 | 50% | |
| Glutamine | Invitrogen | 25030081 | 2mM | |
| Stereotaxic instrument | Stoelting | 51730 | ||
| Foredom flexible shaft drill, hang-up style | Stoelting | 58650 | ||
| Large probe holder | Stoelting | 51633 | ||
| 10 μL syringe, 26 ga., bevel tip | Stoelting | 51105 | ||
| Drill bit .75mm | Stoelting | 51455-3 |
References
- Schuller, U. Acquisition of granule neuron precursor identity is a critical determinant of progenitor cell competence to form Shh-induced medulloblastoma. Cancer Cell. 14, 123-134 (2008).
- Yang, Z. J. Medulloblastoma can be initiated by deletion of Patched in lineage-restricted progenitors or stem cells. Cancer Cell. 14, 135-145 (2008).
- Kessler, J. D. N-myc alters the fate of preneoplastic cells in a mouse model of medulloblastoma. Genes Dev. 23, 157-170 (2009).
- Flora, A., Klisch, T. J., Schuster, G., Zoghbi, H. Y., Y, H. Deletion of Atoh1 disrupts Sonic Hedgehog signaling in the developing cerebellum and prevents medulloblastoma. Science. 326, 1424-1427 (2009).
- Salsano, E. Expression of the neurogenic basic helix-loop-helix transcription factor NEUROG1 identifies a subgroup of medulloblastomas not expressing ATOH1. Neuro Oncol. 9, 298-307 (2007).
