Intracrânienne allogreffe orthotopique de cellules dans des souris immunodéprimées Médulloblastome
Summary
Ce protocole décrit l'isolement et la dissociation des tissus médulloblastome de la souris, et après allogreffe de cellules tumorales dans des souris immunodéprimées bénéficiaires afin d'initier un médulloblastome secondaire.
Abstract
Le médulloblastome est la tumeur la plus fréquente en pédiatrie du système nerveux. Un grand nombre d'études ont porté sur des animaux précurseurs de neurones du cervelet granules (CGNPs) que la cellule d'origine pour un médulloblastome 1-4. Cependant, les diverses présentations cliniques des sous-types médulloblastome chez les patients humains (nodulaire, desmoplastique, classique et à grandes cellules / anaplasique), et le fait que le médulloblastome se trouve dans un sous-ensemble de patients humains sans aucune expression ectopique de CGNP marqueurs 5, suggèrent que le origines moléculaires et cellulaires de médulloblastome sont plus complexes et loin d'être entièrement déchiffré. Par conséquent, il est essentiel de déterminer s'il ya une tumeur médulloblastome alternatives de cellules d'origine sur la base duquel la cellule-type spécifique modalité thérapeutique peut être développée. À cette fin, orthotopique intracrânienne allogreffe d'organismes génétiquement marqués types de cellules tumorales suivie par des analyses ultérieures de développement de tumeurs secondaires chez les receveurs permettra de déterminer l'origine cellulaire des tumeurs initier les cellules. Nous décrivons ici le protocole expérimental pour orthotopique intracrânienne allogreffe de cellules provenant de tissus de médulloblastome tumeur primaire, et cette procédure peut également être utilisé pour la transplantation de cellules de lignées cellulaires établies.
Protocol
Discussion
Plusieurs facteurs essentiels pour assurer la cellule médulloblastome succès allogreffe que la formation de tumeurs secondaires sont des rendements comme suit: Premièrement, utilisez uniquement Accutase 50% pour les tissus de dissociation et de ne plus digérer le tissu comme traitement enzymatique prolongée conduit à une réduction significative de la viabilité cellulaire. Aussi utilisez uniquement le Pipetman taille 1 mL comme petits trucs peuvent aussi générer des dommages physiques aux cellules dissociées. …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Cette étude a été soutenue par des subventions du Vanderbilt-Ingram Cancer Center Grant Support (P30 CA068485), la Fondation des tumeurs cérébrales enfance et les National Institutes of Health (NS042205).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Neurobasal medium | Invitrogen | 21103049 | ||
| hEGF | Invitrogen | PHG0311 | 25ng/ml | |
| bFGF | Invitrogen | PHG0023 | 25ng/ml | |
| N2 | Invitrogen | 17502048 | 1X | |
| B27(-RA) | Invitrogen | 12587010 | 1X | |
| Accutase | Invitrogen | A1110501 | 50% | |
| Glutamine | Invitrogen | 25030081 | 2mM | |
| Stereotaxic instrument | Stoelting | 51730 | ||
| Foredom flexible shaft drill, hang-up style | Stoelting | 58650 | ||
| Large probe holder | Stoelting | 51633 | ||
| 10 μL syringe, 26 ga., bevel tip | Stoelting | 51105 | ||
| Drill bit .75mm | Stoelting | 51455-3 |
References
- Schuller, U. Acquisition of granule neuron precursor identity is a critical determinant of progenitor cell competence to form Shh-induced medulloblastoma. Cancer Cell. 14, 123-134 (2008).
- Yang, Z. J. Medulloblastoma can be initiated by deletion of Patched in lineage-restricted progenitors or stem cells. Cancer Cell. 14, 135-145 (2008).
- Kessler, J. D. N-myc alters the fate of preneoplastic cells in a mouse model of medulloblastoma. Genes Dev. 23, 157-170 (2009).
- Flora, A., Klisch, T. J., Schuster, G., Zoghbi, H. Y., Y, H. Deletion of Atoh1 disrupts Sonic Hedgehog signaling in the developing cerebellum and prevents medulloblastoma. Science. 326, 1424-1427 (2009).
- Salsano, E. Expression of the neurogenic basic helix-loop-helix transcription factor NEUROG1 identifies a subgroup of medulloblastomas not expressing ATOH1. Neuro Oncol. 9, 298-307 (2007).
