דגם orthotopic של סרטן השחלות הצפק ב עכברים immunocompetent עבור In vivo הדמיה ניטור הגידול של המערכת החיסונית גידול
Summary
כדי ללמוד<em> In vivo</em> צמיחת הגידול microenvironment הגידול, השתמשנו במודל עכבר syngeneic ו orthotopic של סרטן השחלות בחיות immunocompetent. אנו transduced גידול העכבר התא קו (MOV1) עם חלבון פלואורסצנטי Katushka (MOV1<sup> קאט</sup>) והנה אנחנו מראים השתלת orthotopic שלה בשחלה ו<em> In vivo</em> הדמיה.
Abstract
רקע: סרטן השחלות מאובחנת בדרך כלל בשלב מתקדם שבו היחס במקרה / הרוגים גבוה ונותר הקטלני ביותר של כל ממאירויות גניקולוגיים בקרב נשים בארה"ב 1,2,3. גידולים הצפק הן הצורות הנפוצות ביותר של סרטן השחלות 4,5 Tg-MISIIR-Tag מהונדס מייצג את מודל העכבר רק באופן ספונטני מפתחת סוג זה של גידולים. Tg-MISIIR-Tag עכברים להביע SV40 הפיכת האזור תחת שליטה של Mullerian מעכבות סוג חומר II קולטן (MISIIR) מקדם הגן 6. קווי מהונדס נוספים זוהו לבטא את transgene תג SV40, אך אינם מפתחים גידולים השחלות. ללא גידול עכברים נוטה להפגין תוחלת החיים האופייני C57Bl / 6 עכברים פוריים. עכברים אלו יכולים לשמש מקבלי allograft syngeneic עבור תאים סרטניים שבודדו Tg-MISIIR-Tag-DR26 עכברים.
המטרה: למרות הגידול הדמיה אפשרי 7, לגילוי מוקדם של גידולים עמוקים מאתגרת בבעלי חיים חיים קטנים. כדי לאפשר מחקרים פרה במודל חיה שלם immunologically לסרטן השחלות הצפק, אנו מתארים במודל עכבר syngeneic עבור סוג זה של סרטן השחלות המאפשר הדמיה in vivo, מחקרים של microenvironment את הגידול ואת התגובה החיסונית הגידול.
שיטות: אנחנו הראשונים נגזר + תג עכבר סרטן תאים קו (MOV1) מן הגידול השחלות ספונטנית שנבצרו נקבה בת 26 בשבוע Tg-MISIIR DR26-Tag. לאחר מכן, אנו ביציבות transduced MOV1 תאים עם וקטור TurboFP635 Lentivirus יונקים המקודד Katushka, מוטציה מרחיקות אדום של חלבון פלואורסצנטי אדום מהים כלנית Entacmaea quadricolor עם עירור / פליטה מקסימום 588/635 ננומטר ב 8,9,10. אנו orthotopically מושתל MOV1 קאט בשחלה 11,12,13,14 שאינם סרטניים Tg-MISIIR-Tag הנשי נוטה עכברים. התקדמות הגידול בעקבות הדמיה אופטית vivo ו microenvironment הגידול נותח על ידי אימונוהיסטוכימיה.
תוצאות: מושתל Orthotopically MOV1 תאים קאט פיתחו גידולים השחלות הצפק. MOV1 גידולים קאט יכול להיות דמיינו ידי in vivo הדמיה עד שלושה שבועות לאחר ההשתלה (איור 1) והם הסתננו עם לויקוציטים, כפי שנצפה ב סרטן השחלות אדם 15 (איור 2).
מסקנות: אנו מתארים מודל orthotopic של סרטן השחלות מתאים בתחום ההדמיה vivo של גידולים מוקדם עקב גבוה-pH יציבות photostability של Katushka ברקמות עמוקות. אנו מציעים להשתמש במודל זה syngeneic הרומן של סרטן שחלות נסיובי עבור במחקרים vivo הדמיה וניטור של המערכת החיסונית ואת immunotherapies הגידול.
Protocol
Discussion
ניתוח וזריקות orthotopic
הזרקת orthotopic בבורסה השחלות דרישות הכשרה דיוק. כך
- במקרה של עניים בפועל כירורגית ניסיון, עם גופות הראשון.
- השתמש מעדיפים נקבות multiparous (א…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי מענק NIH P01-AI 068,730 (SNC, NS), המענק NIH CA016520 / TAPITMAT (NS), את המימון הפרטי מקרן Claneil (NS), ואת השחלות נבג להעניק FCCC ואת אוניברסיטת פנסילבניה ( P50 CA83638) ואת פוקס צ'ייס Cancer Center Core גרנט (P30 CA06927) (DCC). המחברים מודים סיוע טכני מעולה של Core מתקן אופטי / פליטת אור בהנהלת ד"ר EJ Delikatny באוניברסיטת פנסילבניה, אנתוני סקרטו מתא גזע Core xenograft בהנהלת ד"ר ג Danet-דסנוייה באוניברסיטת פנסילבניה סרטן המרכז SNC הכשרה לטכניקה הזרקה orthotopic ו Denada Dangaj באוניברסיטת פנסילבניה / OCRC לסיוע על הניתוח.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-GLUTAMAX | Invitrogen | 10564-011 | ||
| PBS | Gibco | 14040 | ||
| Versene | Lonza | 17-711E | ||
| Heating pad | Deltaphase | 39 DP | ||
| Povidone pads | Dynarex | 1108 | ||
| Alcohol pads | Fisher | 06-669-62 | ||
| Artificial tears ointment | Phoenix Pharma., Inc. | 17845-153 | ||
| Ketoprofen | Fort Dodge laboratories | |||
| 3cc/insulin syringe | BD | 309301 | ||
| Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm) | Syneture | 9612-31 | ||
| Tissue adhesive | Vetbond | 3M | ||
| Vet Bactrim/ oral suspension | Hi-tech Pharmacal | 840823 | ||
| IVIS-Lumina | Caliper lifesciences | |||
| Isofluorane | Phoenix Pharma., Inc. | J108013 | ||
| Fetal Bovine Serum, Qualified | Invitrogen | 10437036 | ||
| Penicillin/streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| TurboFP635 mammalian vector | Evrogen | FP721 | ||
| T175 flasks | cellstar | 660-190 |
References
- Etzioni, R., et al. The case for early detection. Nat Rev Cancer. 3, 243-252 (2003).
- Sasaroli, D., Coukos, G., Scholler, N. Beyond CA125: the coming of age of ovarian cancer biomarkers. Are we there yet. Future Medicine. 3, 275-288 (2009).
- Anderson, G. L., et al. Assessing Lead Time of Selected Ovarian Cancer Biomarkers: A Nested Case Control Study. J Natl Cancer Inst. 102, 26-38 (2010).
- Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology. Endocr Rev 22. , 255-288 (2001).
- Dubeau, L. The cell of origin of ovarian epithelial tumours. Lancet Oncol. 9, 1191-1197 (2008).
- Connolly, D. C., et al. Female mice chimeric for expression of the simian virus 40 TAg under control of the MISIIR promoter develop epithelial ovarian cancer. Cancer Res. 63, 1389-1397 (2003).
- Hensley, H., et al. Magnetic resonance imaging for detection and determination of tumor volume in a genetically engineered mouse model of ovarian cancer. Cancer Biol Ther. 6, (2007).
- Deliolanis, N. C., et al. Performance of the red-shifted fluorescent proteins in deep-tissue molecular imaging applications. J Biomed Opt. 13, (2008).
- Hoffman, R. M. A better fluorescent protein for whole-body imaging. Trends Biotechnol. 26, (2008).
- Shcherbo, D., et al. far-red fluorescent protein for whole-body imaging. Nat Methods. 4, 741-746 (2007).
- Fu, X., Hoffman, R. M. Human ovarian carcinoma metastatic models constructed in nude mice by orthotopic transplantation of histologically-intact patient specimens. Anticancer Res. 13, 283-286 (1993).
- Kiguchi, K., et al. A patient-like orthotopic implantation nude mouse model of highly metastatic human ovarian cancer. Clinical & experimental metastasis 16. , 751-756 (1998).
- Bao, R., et al. Activation of cancer-specific gene expression by the survivin promoter. J Natl Cancer Inst. 94, 522-528 (2002).
- Connolly, D. C., Hensley, H. H. Xenograft and Transgenic Mouse Models of Epithelial Ovarian Cancer and Non Invasive Imaging Modalities to Monitor Ovarian Tumor Growth In situ -Applications in Evaluating Novel Therapeutic Agents. Current Protocols in Pharmacology 45. , 1-36 .
- Milne, K., et al. Systematic analysis of immune infiltrates in high-grade serous ovarian cancer reveals CD20, FoxP3 and TIA-1 as positive prognostic factors. , (2009).
