Einem orthotopen Modell des seröse Ovarialkarzinom in immunkompetenten Mäusen für In vivo Tumor Imaging und Überwachung der Tumor Immunantworten
Summary
Zur Untersuchung<em> In vivo</em> Tumorwachstum und Tumor-Mikroumgebung, verwendeten wir eine syngenen und orthotopen Mausmodell des Ovarialkarzinoms in immunkompetenten Tieren. Wir transduzierten Maus Tumor-Zelllinie (MOV1) mit Katuschka fluoreszierende Protein (MOV1<sup> KAT</sup>) Und hier zeigen wir seine orthotopen Implantation in Ovar und<em> In vivo</em> Bildgebung.
Abstract
Hintergrund: Das Ovarialkarzinom ist in der Regel in einem fortgeschrittenen Stadium, wo der Fall / Todesfall Verhältnis hoch diagnostiziert und bleibt somit die tödlichste aller gynäkologischen Malignomen unter US-Frauen 1,2,3. Serösen Tumoren sind die häufigsten Formen von Eierstockkrebs und 4,5 der Tg-MISIIR-Tag transgenen stellt die einzige Maus-Modell, das sich spontan entwickelt diese Art von Tumoren. Tg-MISIIR-Tag Mäuse exprimieren SV40 transformiert Region unter die Kontrolle des Müllerschen Hemmstoff Typ-II-Rezeptor (MISIIR)-Gen-Promotor 6. Zusätzliche transgenen Linien wurden die Ausdruck der SV40 TAg Transgen identifiziert, aber nicht entwickeln Ovarialtumoren. Non-Tumor anfällig Mäuse zeigen typische Lebensdauer für C57Bl / 6 Mäusen und sind fruchtbar. Diese Mäuse können als syngenen Transplantat-Empfänger für Tumorzellen von Tg-MISIIR-Tag-DR26-Mäusen isoliert eingesetzt werden.
Ziel: Obwohl Tumorimaging ist möglich, 7, Früherkennung von Tumoren tief in kleinen lebenden Tieren schwierig. Um präklinischen Studien in einer immunologisch intakten Tiermodell für seröse Ovarialkarzinom beschreiben wir eine syngenen Mausmodell für diese Art von Eierstock-Krebs, der in-vivo-Bildgebung, Studien über die Tumor-Mikroumgebung des Tumors Immunantwort ermöglicht.
Methoden: Wir erste abgeleitete einem TAG + Maus-Zelllinie (MOV1) aus einem spontanen Ovarialtumor in einem 26 Wochen alten DR26 Tg-MISIIR-Tag weiblichen geerntet. Dann haben wir stabil transduzierten MOV1 Zellen mit TurboFP635 Lentivirus Säugetieren Vektor, Katuschka kodiert, eine weit-rot-Mutante der rot fluoreszierendes Protein aus Seeanemone Entacmaea quadricolor mit Anregung / Emissionsmaxima bei 588/635 nm 8,9,10. Wir orthotop implantiert MOV1 Kat in den Eierstöcken 11,12,13,14 von Nicht-Tumor anfällig Tg-MISIIR-Tag weiblichen Mäusen. Tumorprogression wurde in vivo optische Bildgebung und Tumor-Mikroumgebung wurde mittels Immunhistochemie analysiert gefolgt.
Ergebnisse: orthotop implantiert MOV1 Kat-Zellen entwickelt serösen Ovarialtumoren. MOV1 Kat Tumoren konnten visualisiert werden in-vivo-Bildgebung bis zu drei Wochen nach der Implantation (Abb. 1) und wurden mit Leukozyten infiltriert, wie in menschlichen Eierstockkrebs 15 (Abb. 2) beobachtet.
Schlussfolgerungen: Wir beschreiben einen orthotopen Modell des Ovarialkarzinoms geeignet für in-vivo-Bildgebung des frühen Tumoren aufgrund des hohen pH-Stabilität und Photostabilität Katuschka in tiefen Gewebeschichten. Wir schlagen vor, den Einsatz dieser neuartigen syngenen Modell seröser Eierstockkrebs für die in vivo Bildgebung und Überwachung der Tumor Immunantwort und Immuntherapien.
Protocol
Discussion
Chirurgie und orthotopen Injektionen
Orthotoper Injektion in Eierstock Bursa Anforderungen Ausbildung und Präzision. So
- Im Falle einer schlechten chirurgischen Erfahrung, Praxis mit Leichen zuerst.
- Verwenden Sie bevorzugt multipare Frauen (ein oder zwei Würfe), da sie größere Eierstöcke im Laufe der Zeit die Injektion und die Überlebenszeit ermöglicht mit nulliparen Frauen vergleichen zu entwickeln.
- Aufgrund der geringen Größe der Maus Eierstock Bursa,…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch die NIH P01 AI 068730 (SNC, NS), der NIH CA016520 / TAPITMAT (NS), die private Finanzierung durch die Claneil Foundation (NS), und die Eierstöcke SPORE zu gewähren FCCC und der University of Pennsylvania unterstützt ( P50 CA83638) und der Fox Chase Cancer Center-Core Grant (P30 CA06927) (DCC). Die Autoren bedanken sich die hervorragende technische Unterstützung der Optical / Biolumineszenz Core Facility von Dr. EJ Delikatny an der University of Pennsylvania, Anthony Secreto vom Stem Cell und Xenograft-Core von Dr. G. Danet-Desnoyers an der University of Pennsylvania Cancer gerichteten Center for Training SNC orthotopen Injektionstechnik und Denada Dangaj an der University of Pennsylvania / OCRC für die Unterstützung der Operation.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-GLUTAMAX | Invitrogen | 10564-011 | ||
| PBS | Gibco | 14040 | ||
| Versene | Lonza | 17-711E | ||
| Heating pad | Deltaphase | 39 DP | ||
| Povidone pads | Dynarex | 1108 | ||
| Alcohol pads | Fisher | 06-669-62 | ||
| Artificial tears ointment | Phoenix Pharma., Inc. | 17845-153 | ||
| Ketoprofen | Fort Dodge laboratories | |||
| 3cc/insulin syringe | BD | 309301 | ||
| Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm) | Syneture | 9612-31 | ||
| Tissue adhesive | Vetbond | 3M | ||
| Vet Bactrim/ oral suspension | Hi-tech Pharmacal | 840823 | ||
| IVIS-Lumina | Caliper lifesciences | |||
| Isofluorane | Phoenix Pharma., Inc. | J108013 | ||
| Fetal Bovine Serum, Qualified | Invitrogen | 10437036 | ||
| Penicillin/streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| TurboFP635 mammalian vector | Evrogen | FP721 | ||
| T175 flasks | cellstar | 660-190 |
References
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