عزل الخلايا الليمفاوية T الإنسان والثقافة والتحليل للهجرة في المختبر</em
Summary
اللمفاويات T الهجرة يحدث أثناء صاروخ موجه إلى الأجهزة اللمفاوية ، والخروج من الأوعية الدموية ، والدخول في الأنسجة الطرفية. هنا ، نحن تصف وضع بروتوكول والتي يمكن استخدامها لتحليل الخلايا اللمفاوية تي الهجرة<em> في المختبر</em>.
Abstract
هجرة الخلايا اللمفية تي ينطوي على تفاعل لاصقة من integrins سطح الخلية مع يغاندس أعرب عن الخلايا الأخرى أو مع البروتينات المصفوفة خارج الخلية. تفعيل spatiotemporal دقيقة من integrins من حالة تقارب المنخفضة إلى حالة تقارب عالية عند حافة الخلية يؤدي مهمة لمفاوية T الهجرة<sup> 1</sup>. وبالمثل ، تراجع من حافة الخلية زائدة ، أو قدم ذنبية ، هو خطوة ضرورية في الحفاظ على استمرار اللمفاويات T إنتغرين التي تعتمد على القدرة على الحركة<sup> 2</sup>. مناهج علاجية كثيرة لالمناعة الذاتية أو التهابات لل integrins الأمراض المستهدفة كوسيلة لكبح التوظيف المفرط وهجرة الكريات البيض<sup> 3</sup>. لدراسة الأحداث الجزيئية التي تنظم الهجرة البشرية اللمفاويات T ، واستخدمت لدينا خبير<em> في المختبر</em> نظام الهجرة لتحليل الخلايا على ركيزة ثنائي الأبعاد الذي يحاكي البيئة أن الخلايا اللمفاوية تي واجه خلال التوظيف من الأوعية الدموية. والخلايا اللمفية تي عزله للمرة الأولى من المانحين البشرية وحفز ذلك الحين ، ومثقف لمدة سبعة إلى عشرة أيام. خلال الفحص ، ويسمح الخلايا اللمفية تي الالتزام والهجرة على ركيزة المغلفة مع جزيئات الالتصاق بين الخلايا – 1 (ICAM – 1) ، ويجند لإنتغرين LFA – 1 ، وانسجة الخلايا المشتقة من عامل – 1 (SDF – 1). بياناتنا تظهر أن الخلايا اللمفية تي المعرض سرعة المهاجرة ميكرومتر 15 ~ / دقيقة. ويمكن لمفاوية T الهجرة تثبطها الحصار إنتغرين<sup> 1</sup> أو مثبطات الجهاز أكتوميوزين الخلوية التي تنظم الهجرة الخلية<sup> 2</sup>.
Protocol
Discussion
في هذه التجربة ، ونحن نقدم تفاصيل عن نظام بسيط لتحليل حركية الأولية اللمفاويات التائية البشرية. المقايسات في المختبر الهجرة استخدمت لتشريح أدوار العديد من الجزيئات ومسارات إشارات تشارك في تحرك من مختلف أنواع الخلايا. بعض عناصر التحكم الحرجة أن نأخذ في الاعتبار…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وقد أيد هذا المشروع من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح HL087088 (MK) وHL18208 (MK).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| RPMI 1640 | Gibco | 11875 | ||
| FBS | Thermo Scientific | SH300070.03 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| 1-Step Polymorphs | Accurate Chemical | AN221725 | ||
| PHA | Remel/Fisher Scientific | R30852801 | ||
| Rec. human IL-2 | R&D Systems | 202-IL | ||
| Rec. human IL-15 | R&D Systems | 247-IL | ||
| Protein G | Sigma Aldrich | 19459 | ||
| Rec. human ICAM-1/Fc | R&D Systems | 720-IC | ||
| Rec. human SDF-1 | R&D Systems | 350-NS |
References
- Hyun, Y. M., Chung, H. L., McGrath, J. L., Waugh, R. E., Kim, M. Activated integrin VLA-4 localizes to the lamellipodia and mediates t cell migration on VCAM-1. J Immunol. 183, 359-369 (2009).
- Morin, N. A., Oakes, P. W., Hyun, Y. M., Lee, D., Chin, Y. E., King, M. R., Springer, T. A., Shimaoka, M., Tang, J. X., Reichner, J. S., Kim, M. Nonmuscle myosin heavy chain IIA mediates integrin LFA-1 de-adhesion during T lymphocyte migration. The Journal of experimental medicine. 205, 195-205 (2008).
- Hyun, Y. M., Lefort, C. T., Kim, M. Leukocyte integrins and their ligand interactions. Immunologic research. , (2009).
