Summary

라이브의 자기 공명 분광학 Drosophila melanogaster 매직 앵글 스피닝를 사용하여

Published: April 15, 2010
doi:

Summary

이 기술은 생활의 분자 특성에 대한 양성자 MR 분광법 (1H – MRS HRMAS)를 회전 고해상도 마법 각도의 사용을 가능하게<em> Drosophila melanogaster</em> 기존의 14.1 테슬라 분광계와이 HRMAS 프로브가 장착된.

Abstract

고해상도 매직 각도 스피닝 (HRMAS) 프로톤 자기 공명 분광 (<sup> 1</sup> H – MRS) 스펙트럼 라인 폭을 향상시키고 추출, 손상 세포, 세포 배양, 그리고 더 중요한 것은 그대로 조직에서 얻을 수 고해상도 스펙트럼은 metabolites와 셀룰러 프로세스 간의 관계를 조사 수있는 새로운 비파괴 기술입니다.<em> 생체내에서</em> HRMAS<sup> 1</sup> H – MRS 연구 라이브 과일 파리에보고해야 아직<em> Drosophila melanogaster.</em><em> Drosophila,</em> 간단한 유전자 유기체로, 여러 생물 학적 기능과 다양한 evolutionarily 보존 신호 경로가 전체 유기체 수준에서 검사 수 있으며 그것은 유전자와 생리를 조사하는 유용한 모델입니다. 이를 위해, 우리는 개발 및 구현<em> 생체내에</em> HRMAS<sup> 1</sup라이브 조사> H – MRS 방법<em> Drosophila</em> 여기 14.1 T.에서 우리는 HRMAS을 설명<sup> 1</sup의 분자 특성에 대한> H – MRS 프로토콜<em> Drosophila</em> HRMAS 프로브가 장착된 기존의 MR 분광계와 함께. 이 기법은 소설이다<em> 생체내에</em> 비파괴<em> Drosophila</em따라서 질병 생체 식별을 가능하게하고> 신진 대사 측정 방법은, 소설 치료 발전에 기여 수 있습니다.

Protocol

1 부 : HRMAS 측정 준비 Drosophila 표준 flylab 절차 1을 사용, 새로 3 일간 파리 eclosing 신선한 플라이 음식을 포함하는 튜브를 비행을 전송 수집합니다. 파리 방금 전에 실험 5~8일 이전 될 수 있도록 오일에 대한 수집 파리 알을 품다. 단 하나의 성별은 (보통 남성) 실험에 사용됩니다. 건강을 사용, 손상 야생 유형은 예를 들어 충격이나 유전자 파리 1 개조 치료와 비…

Discussion

과일의 생체내 MRI에의 가능성의 최근 보고서를 제외하고 6 파리, Drosophila의 생체내 MRS 연구 아직보고되지 않았습니다. 현재 프로토콜, 우리는 생물학적으로 중요한 분자를 검출 생체내 HRMAS 1 H – MRS 방식의 소설의 구현을 설명합니다. 제로 파리 사망률을 달성하면서 특히, 우리는 lipids, 라이브 Drosophila의 작은 metabolites 충분한 수집 시간을 허…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 로렌스 G. Rahme에 건강 (NIH) 부여 AI063433의 국립 연구소, 로날드 G. 톰프킨스 (A. 아리아 Tzika의 원장 건강의 국립 연구소 연구소 (NIH) 센터 그랜트 (P50GM021700)에 의해 부분적으로 지원되었다 A. 아리아 Tzika 어린이 연구 부여 (# 8893)에 대한 NMR 코어) 및 슈라 이너 병원. 우리는 Dionyssios Mintzopoulos 박사 감사 이 프로토콜 및 Ovidiu C. Andronesi 박사를 개발의 초기 단계에서 도움을 TOBSY 펄스 시퀀스를 지원.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Deuterium oxide Reagent Sigma-Aldrich 7789-20-0  
3-(trimethylsilyl)propionic-2,2,3,3-d4 acid Reagent Sigma-Aldrich 24493-21-8  
agar, sucrose, yeast, cornmeal Food Genesee Scientific Corporation   http://www.flystuff.com/
Oregon RS or Canton-S flies Adult fly lines Bloomington Stock Center   http://flystocks.bio.indiana.edu/
Paintbrush Equipment     (size 0)
2ml tubes Equipment Fisher Scientific K749521-1590  
Fly incubators Equipment     high humidity capacity (60-75%), adjustable temperature, and a 12 h:12 h light: dark cycle.
Bruker Bio-Spin Avance NMR spectrometer (600.13 MHz) 4mm triple resonance (1H, 13C, 2H) HRMAS probe Equipment Bruker Bio-Spin    
BTO-2000 unit in combination with a MAS pneumatic unit Equipment Bruker Bio-Spin    
4mm zirconium oxide rotor (capacity 50 ul) Equipment Bruker Bio-Spin B3829 (Bruker store)  
MestReC (Mestrelab Research) Software     1D NMR spectra analysis
http://mestrelab.com/
SPARKY 3, USCF Software     2D NMR spectra analysis
http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/

References

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Cite This Article
Righi, V., Apidianakis, Y., Rahme, L. G., Tzika, A. A. Magnetic Resonance Spectroscopy of live Drosophila melanogaster using Magic Angle Spinning. J. Vis. Exp. (38), e1710, doi:10.3791/1710 (2010).

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