Summary

Spettroscopia di Risonanza Magnetica dal vivo Drosophila melanogaster Utilizzando Magic Angle Spinning

Published: April 15, 2010
doi:

Summary

Questa tecnica consente l'utilizzo di alta risoluzione magic angle spinning spettroscopia RM del protone (1H-MRS HRMAS) per la caratterizzazione molecolare di vivere<em> Drosophila melanogaster</em> Con un tradizionale 14,1 tesla spettrometro dotato di una sonda HRMAS.

Abstract

Ad alta risoluzione magico angolo Spinning (HRMAS) spettroscopia di risonanza magnetica protonica (<sup> 1</sup> H-MRS) è una nuova tecnica non distruttiva che migliora spettrale linea larghezza e permette ad alta risoluzione da spettri ottenuti da estratti, di cellule intatte, colture cellulari e tessuti più importante intatto per indagare i rapporti tra i metaboliti e dei processi cellulari.<em> In vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS studi devono ancora essere riportato nel moscerino della frutta dal vivo<em> Drosophila melanogaster.</em><em> Drosophila,</em> Come un organismo semplice genetica, permette molteplici funzioni biologiche e diverse vie di segnalazione evolutivamente conservata da esaminare a livello intero organismo ed è un modello utile per studiare la genetica e la fisiologia. A tal fine, abbiamo sviluppato e implementato un<em> In vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS metodo per studiare dal vivo<em> Drosophila</em> Al 14,1 T. Qui, delineare un HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS protocollo per la caratterizzazione molecolare di<em> Drosophila</em> Con uno spettrometro convenzionale RM dotato di una sonda HRMAS. Questa tecnica è un romanzo,<em> In vivo,</em> Non distruttiva<em> Drosophila</emApproccio di misura> metabolita, che consente l'identificazione di biomarcatori malattia e possono quindi contribuire al romanzo di sviluppo terapeutico.

Protocol

Parte 1: Preparazione della Drosophila per le misure HRMAS Utilizzando le normali procedure flylab 1, raccogliere nuovi eclosing vola per 3 giorni e trasferirli a volare flaconi contenenti prodotti alimentari freschi volare. Incubare le mosche raccolti per 5 giorni in modo che le mosche diventerà 5-8 giorni vecchio appena prima dell'esperimento. Solo sesso (in genere maschi) viene utilizzato per gli esperimenti. Uso sano, integro tipo selvatico vola da confrontare con tratta…

Discussion

Con l'eccezione del recente rapporto della fattibilità di risonanza magnetica in vivo nei moscerini della frutta 6, studi in vivo MRS in Drosophila non sono ancora stati segnalati. Nel presente protocollo, si descrive l'implementazione di un romanzo in vivo HRMAS 1 H-MRS approccio per la rilevazione di molecole biologicamente importanti. In particolare, abbiamo rilevato lipidi e metaboliti piccoli vivono Drosophila vola al 14,1 T in circa 45 min…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato sostenuto in parte da una National Institutes of Health (NIH) a concedere AI063433 Laurence G. Rahme, una Istituti National Institute of Health (NIH) Centro Grant (P50GM021700) di Ronald Tompkins G. (A. Tzika Aria, Direttore del il nucleo NMR), e un Ospedale per i bambini Shriner assegno di ricerca (# 8893) ad A. Aria Tzika. Ringraziamo Dionyssios Mintzopoulos Ph.D. per l'assistenza nelle fasi iniziali di sviluppo di questo protocollo e Ovidiu C. Andronesi Ph.D. per l'assistenza con la sequenza di impulsi TOBSY.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Deuterium oxide Reagent Sigma-Aldrich 7789-20-0  
3-(trimethylsilyl)propionic-2,2,3,3-d4 acid Reagent Sigma-Aldrich 24493-21-8  
agar, sucrose, yeast, cornmeal Food Genesee Scientific Corporation   http://www.flystuff.com/
Oregon RS or Canton-S flies Adult fly lines Bloomington Stock Center   http://flystocks.bio.indiana.edu/
Paintbrush Equipment     (size 0)
2ml tubes Equipment Fisher Scientific K749521-1590  
Fly incubators Equipment     high humidity capacity (60-75%), adjustable temperature, and a 12 h:12 h light: dark cycle.
Bruker Bio-Spin Avance NMR spectrometer (600.13 MHz) 4mm triple resonance (1H, 13C, 2H) HRMAS probe Equipment Bruker Bio-Spin    
BTO-2000 unit in combination with a MAS pneumatic unit Equipment Bruker Bio-Spin    
4mm zirconium oxide rotor (capacity 50 ul) Equipment Bruker Bio-Spin B3829 (Bruker store)  
MestReC (Mestrelab Research) Software     1D NMR spectra analysis
http://mestrelab.com/
SPARKY 3, USCF Software     2D NMR spectra analysis
http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/

References

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Cite This Article
Righi, V., Apidianakis, Y., Rahme, L. G., Tzika, A. A. Magnetic Resonance Spectroscopy of live Drosophila melanogaster using Magic Angle Spinning. J. Vis. Exp. (38), e1710, doi:10.3791/1710 (2010).

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