Summary

ספקטרוסקופיית תהודה מגנטית של חיים תסיסנית melanogaster באמצעות ספינינג זווית הקסם

Published: April 15, 2010
doi:

Summary

טכניקה זו מאפשרת את השימוש זווית ברזולוציה גבוהה קסם ספינינג פרוטון MR ספקטרוסקופיה (HRMAS 1H-MRS) לאפיון מולקולרי של חיים<em> תסיסנית melanogaster</em> עם קונבנציונלית 14.1 טסלה ספקטרומטר מצויד בדיקה HRMAS.

Abstract

ברזולוציה גבוהה קסם זווית ספינינג (HRMAS) פרוטון ספקטרוסקופיית תהודה מגנטית (<sup> 1</sup> H-MRS) היא טכניקה רומן הרסני המשפרת ספקטרלי, רוחב קו ומאפשר ברזולוציה גבוהה ספקטרה להיות המתקבל תמציות, תאים שלמים, תרביות תאים, ורקמות יותר שלם וחשוב לחקור את היחסים בין מטבוליטים ועל תהליכים תאיים.<em> ב-vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS מחקרים טרם דווח על זבוב הפירות לחיות<em> תסיסנית melanogaster.</em><em> תסיסנית,</em> כאורגניזם גנטית פשוטה, מאפשר תפקודים ביולוגיים רבים ומגוונים מסלולי איתות שמור באבולוציה להיבחן ברמת האורגניזם השלם, וזה מודל שימושי לחקר הגנטיקה ופיזיולוגיה. לשם כך, פיתחנו ויישמנו<em> In vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS שיטה לחקור לחיות<em> תסיסנית</em> ב 14.1 ט 'הנה, אנחנו המתאר HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS פרוטוקול לאפיון מולקולרי של<em> תסיסנית</em> עם ספקטרומטר MR קונבנציונאלי מצויד בדיקה HRMAS. טכניקה זו היא רומן,<em> In vivo,</em> שאינו הרסני<em> תסיסנית</em> גישת מדידה המטבוליט, המאפשר זיהוי של סמנים ביולוגיים למחלה ולכן עשויים לתרום לפיתוח טיפולית חדשנית.

Protocol

חלק 1: תסיסנית הכנה מדידות HRMAS באמצעות תקן flylab נהלים 1, לאסוף החדש eclosing זבובים במשך 3 ימים ולהעביר אותם לטוס צלוחיות המכילות מזון לעוף טרי. דגירה הזבובים שנאספו במשך 5 ימים, כך הזבובים יהיה 5-8 ימים רק לפני הניסו?…

Discussion

למעט הדוח האחרון של היתכנות של MRI in vivo בפרי זבובים 6, in vivo גברת לימודי תסיסנית טרם דיווחו. בפרוטוקול הנוכחי, אנו מתארים את יישום רומן בגישה vivo HRMAS H-1 גברת לאיתור מולקולות חשובות מבחינה ביולוגית. במפורש, זיהינו שומנים מטבוליטים קטנים לחיות …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) כדי להעניק AI063433 לורנס ג רחמה, מכון המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) מרכז גרנט (P50GM021700) כדי רונלד ג טומפקינס (א 'אריה ציקה, מנהל הליבה NMR), ובית החולים של שריינרים לילדים מענק מחקר (# 8893) א 'אריה ציקה. אנו מודים Dionyssios Mintzopoulos Ph.D. סיוע בשלבים הראשונים של פיתוח זה פרוטוקול Ovidiu ג Andronesi Ph.D. לקבלת סיוע עם רצף הדופק TOBSY.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Deuterium oxide Reagent Sigma-Aldrich 7789-20-0  
3-(trimethylsilyl)propionic-2,2,3,3-d4 acid Reagent Sigma-Aldrich 24493-21-8  
agar, sucrose, yeast, cornmeal Food Genesee Scientific Corporation   http://www.flystuff.com/
Oregon RS or Canton-S flies Adult fly lines Bloomington Stock Center   http://flystocks.bio.indiana.edu/
Paintbrush Equipment     (size 0)
2ml tubes Equipment Fisher Scientific K749521-1590  
Fly incubators Equipment     high humidity capacity (60-75%), adjustable temperature, and a 12 h:12 h light: dark cycle.
Bruker Bio-Spin Avance NMR spectrometer (600.13 MHz) 4mm triple resonance (1H, 13C, 2H) HRMAS probe Equipment Bruker Bio-Spin    
BTO-2000 unit in combination with a MAS pneumatic unit Equipment Bruker Bio-Spin    
4mm zirconium oxide rotor (capacity 50 ul) Equipment Bruker Bio-Spin B3829 (Bruker store)  
MestReC (Mestrelab Research) Software     1D NMR spectra analysis
http://mestrelab.com/
SPARKY 3, USCF Software     2D NMR spectra analysis
http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/

References

Play Video

Cite This Article
Righi, V., Apidianakis, Y., Rahme, L. G., Tzika, A. A. Magnetic Resonance Spectroscopy of live Drosophila melanogaster using Magic Angle Spinning. J. Vis. Exp. (38), e1710, doi:10.3791/1710 (2010).

View Video