בלוק תא הכנה מן הדגימה ציטולוגיה עם דומיננטיות של תאים פזורים בנפרד
Summary
Shidham של שיטה להכנת קוביות תא עם סמן-AV מתוך דגימות ציטולוגיה המכיל תאים מפוזרים באופן פרטני ובקבוצות תאים קטנים.
Abstract
וידאו זה מדגים שיטה של Shidham להכנת קוביות התא מבוסס דגימות נוזל המכיל תאים ציטולוגיה cervicovaginal מפוזרים באופן פרטני ובקבוצות תאים קטנים. טכניקה זו משתמשת HistoGel (Thermo Scientific) עם ציוד מעבדה קונבנציונאלי.
השימוש בסעיפים לחסום התא הוא כלי עזר רב ערך לצורך הערכה של אי – גניקולוגיים ציטולוגיה. הם מאפשרים cytopathologist ללמוד הדגימה נוספים פרט מורפולוגיים כולל הארכיטקטורה של הנגע. והכי חשוב, הם מאפשרים הערכה של מחקרים נלווים כגון immunocytochemistry, ב-situ הכלאה בדיקות (דגים / CISH) ו-situ שרשרת פולימראז התגובה (PCR). מסורתית לחסום תא טכניקות הכנה יש בעיקר הוחל הלא גניקולוגיים דגימות ציטולוגיה, בדרך כלל נוזל השתפכויות הגוף בסדר השאיפה ביופסיות מחט.
דגימות נוזל cervicovaginal מבוססות יחסית הסלולר פחות מאשר עמיתיהם הלא גניקולוגיים שלהם עם הרבה תאים מפוזרים בודדים. בגלל זה, תאיות הולם בתוך התא לחסום חלקים קשה להשיג. בנוסף, histotechnologist חתך את גוש לא יכול לדמיין את הרמה שבה התאים הם בריכוז הגבוה ביותר. לכן, קשה לפקח על רמת המתאים שבו ניתן לזהות קטעים נבחרים שיועברו השקופיות זכוכית לבדיקה. כתוצאה מכך, באזור גוש תא עם התאים של עניין עלול לפספס, או על ידי חיתוך בעבר או לא לחתוך עמוק מספיק. פרוטוקול נוכחי השיטה של Shidham כתובות בנושאים אלה. אף על פי פרוטוקול זה טופל ודווח על גניקולוגיים דגימות נוזלי המבוסס ציטולוגיה, זה יכול להיות מיושם גם לא גניקולוגיים דגימות כגון נוזלים תפליט, FNA, כמברשות, תוכן וכו 'ציסטה עבור שיפור איכות החומר אבחון בסעיפים לחסום התא.
Protocol
Discussion
בלוקים סלולריים הם כלי רב ערך לצורך הערכה של דגימות ציטולוגיה שונים (1). והכי חשוב, בנוסף את הפרטים האדריכליים של הדגימה, בלוקים תא לאפשר הערכה של מחקרים נלווים כגון immunocytochemistry, ניאון / chromogenic ב-situ הכלאה בדיקות (דגים / CISH) ו-situ PCR. מגוון שיטות להכנת לחסום התא מתוארים. עם זאת, רוב אלה מתאימים לא גניקולוגיים דגימות ציטולוגיה אשר מכילים תאים רבים יחסית עם microfragments רקמות כגון FNA aspirates וכמה נוזלים כגון השתפכויות הצפק (1,3,4,5).
מכיוון רחובות התא בעיקר לספק הזדמנות להערכה immunocytochemical, עיבוד שלהם רצוי להיות דומה לזה של פורמלין-קבוע פרפין, מוטבע (FFPE) ברקמות. בסופו של דבר התוצאות שהתקבלו לאחר הערכה immunocytochemical סעיפים לחסום סלולריים הם בהשוואה לאלו עם שפורסמו בספרות המדעית ובהם מבוצע בעיקר על קטעי רקמה FFPE. כל השינויים בפרוטוקול פוטנציאל פשרה לבטל את תוקפו של התוצאות שהושגו על בלוקים תא מעובד באמצעות fixatives שונים רצפים מגיב אחרת מזו המשמש FFPE שגרתית. כמה טכניקות מסחרי יכול להיות החיסרון של עיבוד באמצעות פרוטוקול החשיפה חשיפה מקבע, מגיב אחרת.
שיטות שונות של הכנה לחסום תא זמינים עבור דגימות עם כמות משמעותית של משקעים ושברי רקמות. בעיקר, במשקעים מרוכז נתמכים על ידי ג'ל חלק או עקרון קרישה. כפתור תמרון מוטבע אז לאחר עיבוד כמו דגימות לפתולוגיה / ביופסיה כירורגית פרפין.
ג'ל המשמש כוללים אגר ג'לטין, פיברינוגן / פלזמה תרומבין, וג'ל מסחריים אחרים כגון HG. שיטות ריכוז להשתנות pelleting פשוט המשקע על ידי צנטריפוגה ריכוז של תאים לאורך סוגים שונים של ממברנות. דוגמאות כוללות: Milipore, collodin (Celloidin) שקיות או מגרדים את התאים מן מריחות ציטולוגיה בשקופיות זכוכית (1). החוקרים העריכו גם מגוון רחב של ג'לים ידי מנסה שילובים שונים של אגר ואת הג'לטין. אף אחד השילובים להשיג את העקביות חברה מספיק כדי להשיג יכולת תמרון בקלות דיסק של ג'ל הקרושה עם תאים מוטבע מן הדגימה בחתיכה אחת. HG הראו עקביות המתאים בחוויה שלנו את התוצאות immunostaining על לחסום חלקים HG התא היה מעולה.
נוזלי מבוסס ציטולוגיה (LBC) דגימות עבור ציטולוגיה cervicovaginal הסלולר הם בדרך כלל פחות מאשר הלא גניקולוגיים דגימות כאמור לעיל. בנוסף, LBC דגימות גניקולוגיים בעיקר מכילים תאים בודדים פזורים שטחי מודבק מתוך רירית cervicovaginal. בגלל זה, תאיות המתאים בתוך התא לחסום חלקים לא ניתן להשיג ללא גישה מיוחדת. כמו אלה הפזורים ביחידות רכיבים סלולריים בבלוק לא ניתן לראות על ידי histotechnologist במהלך חיתוך קטע, ברמה שבה התאים יתחילו להופיע בחלקים לא יכול להיות מוערך ועלול לפספס, או על ידי חיתוך בעבר ברמה עם רוב התאים או לא חיתוך עמוק מספיק לתוך הרמה עם הריכוז הגבוה ביותר של תאים מדגם (איור 4). פרוטוקול של Shidham כתובות שתי בעיות אלה באמצעות HG כמו הטבעה ציוד מעבדה בינוני קונבנציונאלי (2) (איור 2).
פרוטוקול זה כרוך הבאים שתי תכונות עיקריות (איור 1):
- ריכוז מערך של תאים מפוזרים ביחידות במטוס צר סמוך ובמקביל משטח חיתוך של גוש תא (איור 5).
- הכללה של סמן-AV מגדלור כמו כהה כמו תמרור. זה קריטי להשגת התכונות הבאות:
- זיהוי וניטור הרמה שבה התאים מרוכזים לחסום את התא. חשיפת שלט בצבע כהה מדגיש את הרמה שבה רוב התאים מפוזרים ביחידות בבלוק תא צפויים להיות ממוקם (איור 4). הדבר מונע overcutting (חיתוך בעבר ברמה עם רוב התאים) או undercutting (לא לחתוך עמוק מספיק לתוך הרמה עם הריכוז הגבוה ביותר של תאים לדוגמה) כדי לחסום את התא ולאפשר מבחר קטעים מן הרמה הממוצעת של לחסום את התא המתאים עם הריכוז הגבוה ביותר של תאים.
- תמרור כהה בחלקים משמש גם כנקודת התייחסות לסקר ולזהות בדיוק את אותם תאים בחלקים שונים של סידורי לחסום את התא על שקופיות שונות (איור 4). זה קריטי תוך פרשנות והערכה של מאפייני לתאם immunoprofile כזה של תאים מסוימים על ידי הגישה SCIP לעקוב אחר תאים אותו בחלקים שונים (6,7).
למרות our הוא פרוטוקול סטנדרטי דיווח על בסיס דגימות נוזל ציטולוגיה צוואר הרחם, הוא גם יכול לשמש כדי לשפר את התשואה של אבחון רבים שאינם גניקולוגיים דגימות אחרות כגון נוזלים תפליט, FNA, כמברשות, תוכן הציסטה וכו 'בנוסף את הסמן AV יקל משופרת היישום של הגישה SCIP במהלך הערכה immunohistochemical סעיפים בלוק של דגימות תאים אלה. המדיום הטבעה עשוי להיות מוחלף על ידי חומרים כימיים אחרים עם שינויים מתאימים בכל הצעדים הרלוונטיים. HG עשוי להיות מוחלף על ידי פלזמה (פיברינוגן) להיות בג'ל על ידי טרומבין בטמפרטורת החדר (1).
Acknowledgements
המחברים מודים כריס Chartrand, HT (ASCP) עבור הוכחת את סעיף החנית של לחסום את התא עם הסמן AV.
References
- Shidham, V. B., Epple, J., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. Chapter 14, Appendix I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation. Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids. , .
- Varsegi, G., D’Amore, K., Shidham, V. p16INK4a Immunocytochemistry as an Adjunct to Cervical Cytology – Potential Reflex Testing on Specially Prepared Cellblocks from Residual Liquid Based Cytology (LBC) Specimens. Modern Pathology 22: 98th Annual Meeting of United States and Canadian Academy of Pathology. , 97a-97a (2009).
- Nigro, K., Tynski, Z., Wasman, J., Abdul-Karim, F., Wang, N. Comparison of cell block preparation methods for nongynecologic ThinPrep specimens. Diagn Cytopathol. 35, 640-643 (2007).
- Saleh, H. A., Hammoud, J., Zakaria, R., Khan, A. Z. Comparison of Thin-Prep and cell block preparation for the evaluation of Thyroid epithelial lesions on fine needle aspiration biopsy. CytoJournal. 5, 3-3 (2008).
- Kyroudi, A., Paefthimiou, M., Symiakaki, H., Mentzelopoulou, P., Voulgaris, Z., Karakitsos, P. Increasing diagnostic accuracy with a cell block preparation from thin-layer endometrial cytology: a feasibility study. Acta Cytol. 50, 63-69 (2006).
- Atkinson, B. F., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. Chapter 5: Immunocytochemistry of effusion fluids: introduction to SCIP approach (Chapter 5. Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids. , (2007).
- Shidham, V. B., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. Chapter 15, Appendix II: Immunocytochemistry of effusions processing and commonly used immunomarkers. Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids. , (2007).
