Cell Block Bereiden uit Cytologie Model met overwegend Individueel verspreide cellen
Summary
Shidham de methode voor de bereiding van cel blokken met AV-marker van cytologie exemplaren, die elk verspreid cellen en kleine celgroepen.
Abstract
Deze video toont Shidham de methode voor de bereiding van de cel blokken van vloeistof op basis cervicovaginal cytologie exemplaren, die elk verspreid cellen en kleine celgroepen. Deze techniek maakt gebruik van HistoGel (Thermo Scientific) met conventionele laboratorium apparatuur.
Het gebruik van cell block secties is een waardevolle aanvullende instrument voor evaluatie van de niet-gynaecologische cytologie. Ze stellen de cytopathologist om extra morfologische exemplaar details waaronder de architectuur van de laesie studie. Het belangrijkste is dat ze zorgen voor de evaluatie van de bijkomende studies als immunocytochemie, in-situ hybridisatie test (FISH / CISH) en in-situ polymerase chain reaction (PCR). Traditionele cellenblok bereidingstechnieken zijn meestal toegepast op de niet-gynaecologische cytologie preparaten, typisch voor lichaamsvocht effusies en fijne naald aspiratie biopsie.
Vloeistof op basis cervicovaginal exemplaren zijn relatief minder mobiel dan hun niet-gynaecologische tegenhangers met vele individuele verspreide cellen. Vanwege dit, adequate cellulariteit binnen de cel blok onderdelen is moeilijk te bereiken. Daarnaast kan de histotechnologist snijden het blok niet te visualiseren het niveau waarop de cellen worden bij de hoogste concentratie. Daarom is het moeilijk te controleren het juiste niveau waarop secties kunnen worden geselecteerd om te worden overgebracht naar de glazen dia's voor het testen. Als gevolg daarvan kan de oppervlakte van de cel blok met de cellen van belang worden gemist, hetzij door te snijden verleden of niet snijden diep genoeg. Huidige protocol voor de methode Shidham adressen van deze problemen. Hoewel dit protocol is gestandaardiseerd en gerapporteerd voor gynaecologische vloeistof op basis cytologie exemplaren, kan het ook worden toegepast op niet-gynaecologisch exemplaren, zoals effusie vloeistoffen, FNA, poetsen, cyste inhoud etc voor betere kwaliteit van diagnostisch materiaal in de cel te blokkeren secties.
Protocol
Discussion
Cel blokken zijn een waardevol instrument voor de evaluatie van de verschillende cytologie specimens (1). Het belangrijkste is, in aanvulling op de architecturale details van het model, cel-blokken zorgen voor de evaluatie van bijkomende studies als immunocytochemie, fluorescerende / chromogene in-situ hybridisatie test (FISH / CISH) en de in-situ PCR. Een verscheidenheid van methoden voor de voorbereiding van cellenblok worden beschreven. Echter, de meeste van deze zijn geschikt voor niet-gynaecologische cytologie monsters, die relatief veel cellen bevatten, en met weefsel microfragments zoals in FNA zuigt en een aantal sereuze vloeistoffen zoals ontboezemingen (1,3,4,5).
Omdat de cel blokkeert in de eerste plaats de mogelijkheid van een immunocytochemische evaluatie, moet de verwerking bij voorkeur vergelijkbaar met die van de formaline-gefixeerd paraffine-ingebed (FFPE) weefsels. Uiteindelijk de resultaten die zijn verkregen na immunocytochemische evaluatie van de cel te blokkeren secties worden vergeleken met die van de gepubliceerde literatuur voornamelijk uitgevoerd op FFPE weefselcoupes. Eventuele wijzigingen in het protocol mogelijk compromis en teniet te doen de geldigheid van de resultaten verkregen op celblokken worden verwerkt door middel van verschillende fixatieven en reagens sequenties andere dan die wordt gebruikt voor routine FFPE. Enkele commerciële technieken kunnen hebben het nadeel van de verwerking door middel van een protocol van de blootstelling aan andere fixatief-reagens blootstelling.
Verschillende methoden van de cel te blokkeren voorbereiding zijn beschikbaar voor exemplaren met een aanzienlijke hoeveelheid sediment en weefsel fragmenten. In principe worden de sedimenten geconcentreerd wordt ondersteund door een gel of coagulatie principe. De wendbaar knop is dan ingebed in paraffine na verwerking, zoals de chirurgische pathologie exemplaren / biopten.
Gebruikte de gels zijn gelatine, agar, fibrinogeen / plasma-trombine, en andere commerciële gels, zoals HG. De methoden van concentratie varieert van eenvoudige pelleteren van het sediment door centrifugeren om de concentratie van de cellen langs verschillende soorten membranen. Voorbeelden hiervan zijn: Milipore, collodin (Celloidin) zakken of schrapen van de cellen van de cytologie vlekken op glazen objectglaasjes (1). We hebben ook onderzocht een groot aantal gels door te proberen verschillende combinaties van agar en gelatine. Geen van de combinaties bereikte een stevig genoeg consistentie een makkelijk wendbaar schijf van gestolde gel te verkrijgen met embedded cellen van het model in een stuk. HG toonde juiste consistentie en in onze ervaring de immunokleuring resultaten op HG celblok secties zijn uitstekend.
Vloeistof op basis van cytologie (LBC) monsters voor cervicovaginal cytologie zijn over het algemeen minder mobiel dan niet-gynaecologische exemplaren zoals hierboven vermeld. Daarnaast heeft de gynaecologische LBC exemplaren voornamelijk bevatten individuele verspreide geëxfolieerde oppervlakkige cellen van cervicovaginal slijmvlies. Door deze, kunnen passende cellulariteit binnen de cel blok secties niet worden bereikt zonder een speciale aanpak. Aangezien deze afzonderlijk verspreid cellulaire componenten in de het blok kan niet worden gezien door de histotechnologist tijdens de sectie snijden, kan het niveau waarop de cellen start verschijnen in de secties niet op prijs gesteld en kunnen gemist worden, hetzij door te snijden langs het niveau met de meeste cellen of niet snijden diep genoeg in het niveau met de hoogste concentratie van het monster cellen (figuur 4). Shidham's protocol richt deze beide aspecten met behulp van HG voor de inbedding en conventionele laboratorium apparatuur (2) (figuur 2).
Dit protocol gaat volgende twee belangrijke functies (figuur 1):
- Concentratie en uitlijning van afzonderlijk verspreid cellen in een smalle vlak naast en parallel aan het snijvlak van de cel blok (figuur 5).
- Opname van een baken-like dark AV-marker als een wegwijzer. Dit is essentieel voor het bereiken van volgende functies:
- Identificeren en bewaken van het niveau waarop de cellen zijn geconcentreerd in de cel te blokkeren. De belichting van de donkere gekleurde wegwijzer highlights het niveau waarop het merendeel van de singly verspreide cellen in de cel blok zullen naar verwachting worden gevestigd (figuur 4). Dit voorkomt de oversnijding (snijden langs het niveau met de meeste cellen) of prijsonderbieding (niet snijden diep genoeg in het niveau met de hoogste concentratie van het monster cellen) in de cel te blokkeren en de selectie van de secties van het niveau in de cel blok correspondeert met de hoogste concentratie staat van cellen.
- De donker gekleurde wegwijzer in de secties dient ook als een referentiepunt te overzien en precies dezelfde cellen te identificeren in verschillende seriële secties van de cel te blokkeren op verschillende dia's (figuur 4). Dit is van cruciaal belang tijdens het interpreteren en evalueren van de te coördineren eigenschappen zoals immunoprofile van bepaalde cellen van het SCIP benadering van dezelfde cellen te volgen in verschillende secties (6,7).
Hoewel de our protocol is gestandaardiseerd en gerapporteerd voor vloeibare cervixslijm exemplaren, het kan ook gebruikt worden om diagnostische opbrengst van de vele andere niet-gynaecologische exemplaren, zoals effusie vloeistoffen, FNA, poetsen, cyste inhoud etc. Daarnaast versterken de AV marker zou vergemakkelijken verbeterd toepassing van SCIP aanpak tijdens de immunohistochemische evaluatie van de cel te blokkeren delen van deze specimens. De inbedding medium kan worden vervangen door andere reagentia met de nodige wijzigingen op relevante stappen. HG kan worden vervangen door plasma (fibrinogeen) te gegeleerd door trombine bij kamertemperatuur (1).
Acknowledgements
De auteurs danken Chris Chartrand, HT (ASCP) voor het aantonen van de sectie te snijden van de cel blok met AV marker.
References
- Shidham, V. B., Epple, J., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. Chapter 14, Appendix I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation. Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids. , .
- Varsegi, G., D’Amore, K., Shidham, V. p16INK4a Immunocytochemistry as an Adjunct to Cervical Cytology – Potential Reflex Testing on Specially Prepared Cellblocks from Residual Liquid Based Cytology (LBC) Specimens. Modern Pathology 22: 98th Annual Meeting of United States and Canadian Academy of Pathology. , 97a-97a (2009).
- Nigro, K., Tynski, Z., Wasman, J., Abdul-Karim, F., Wang, N. Comparison of cell block preparation methods for nongynecologic ThinPrep specimens. Diagn Cytopathol. 35, 640-643 (2007).
- Saleh, H. A., Hammoud, J., Zakaria, R., Khan, A. Z. Comparison of Thin-Prep and cell block preparation for the evaluation of Thyroid epithelial lesions on fine needle aspiration biopsy. CytoJournal. 5, 3-3 (2008).
- Kyroudi, A., Paefthimiou, M., Symiakaki, H., Mentzelopoulou, P., Voulgaris, Z., Karakitsos, P. Increasing diagnostic accuracy with a cell block preparation from thin-layer endometrial cytology: a feasibility study. Acta Cytol. 50, 63-69 (2006).
- Atkinson, B. F., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. Chapter 5: Immunocytochemistry of effusion fluids: introduction to SCIP approach (Chapter 5. Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids. , (2007).
- Shidham, V. B., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. Chapter 15, Appendix II: Immunocytochemistry of effusions processing and commonly used immunomarkers. Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids. , (2007).
