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レンチウイルス媒介CRISPR/Cas9遺伝子編集を用いたノックアウト筋細胞株の開発
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Development of Knock-Out Muscle Cell Lines using Lentivirus-Mediated CRISPR/Cas9 Gene Editing
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Click here for the English version.
レンチウイルス媒介CRISPR/Cas9遺伝子編集を用いたノックアウト筋細胞株の開発
DOI:
10.3791/64114-v
•
10:12 min
•
June 16, 2022
•
Mathilde Beaufils
,
Amandine Tourel
,
Anne Petiot
,
Nicole B. Halmai
,
Dave J. Segal
,
John Rendu
,
Isabelle Marty
1
University Grenoble Alpes, INSERM, U1216, CHU Grenoble Alpes, Grenoble Institut Neurosciences
,
2
Genome Center
,
University of California, Davis
Chapters
00:05
Introduction
00:43
CRISPR Guide Design
02:03
Plasmid Cloning
03:43
Lentivirus Production
06:28
Myoblast Transduction
07:20
Functional Characterization of Edited Clones
08:53
Results: Development of RYR1-Knock Out Human Muscle Cell Line
09:42
Conclusion
Summary
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このプロトコルは、ガイドRNAの設計からノックアウトクローンの細胞クローニングおよび特性評価まで、CRISPR/Cas9を使用してノックアウト筋芽細胞を生成する方法を説明しています。
Tags
CRISPR/Cas9
Gene Editing
Knock-out
Muscle Cells
Lentivirus
IPS Cells
Guide RNA
PCR
Agarose Gel
Restriction Enzymes
Plasmid Cloning
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