Development of Knock-Out Muscle Cell Lines using Lentivirus-Mediated CRISPR/Cas9 Gene Editing

Mathilde Beaufils; Amandine Tourel; Anne Petiot; Nicole B. Halmai; Dave J. Segal; John Rendu; Isabelle Marty

doi:10.3791/64114

Journal

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유전학

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Sviluppo di linee cellulari muscolari knock-out utilizzando l'editing genetico CRISPR/Cas9 mediato da lentivirus

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Development of Knock-Out Muscle Cell Lines using Lentivirus-Mediated CRISPR/Cas9 Gene Editing

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Sviluppo di linee cellulari muscolari knock-out utilizzando l'editing genetico CRISPR/Cas9 mediato da lentivirus

DOI:

10.3791/64114-v

•

10:12 min

•

June 16, 2022

•

Mathilde Beaufils, Amandine Tourel, Anne Petiot, Nicole B. Halmai, Dave J. Segal, John Rendu, Isabelle Marty

¹University Grenoble Alpes, INSERM, U1216, CHU Grenoble Alpes, Grenoble Institut Neurosciences, ²Genome Center,University of California, Davis

Chapters

00:05Introduction
00:43CRISPR Guide Design
02:03Plasmid Cloning
03:43Lentivirus Production
06:28Myoblast Transduction
07:20Functional Characterization of Edited Clones
08:53Results: Development of RYR1-Knock Out Human Muscle Cell Line
09:42Conclusion

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Il protocollo descrive come generare mioblasti knock-out utilizzando CRISPR/Cas9, partendo dalla progettazione di RNA guida alla clonazione cellulare e alla caratterizzazione dei cloni knock-out.

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