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天然的に無秩序なタンパク質の自己会合の検出と特性評価のための常磁性緩和増強
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Paramagnetic Relaxation Enhancement for Detecting and Characterizing Self-Associations of Intrinsically Disordered Proteins
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Click here for the English version.
天然的に無秩序なタンパク質の自己会合の検出と特性評価のための常磁性緩和増強
DOI:
10.3791/63057-v
•
07:24 min
•
September 23, 2021
•
Courtney N. Johnson
,
David S. Libich
1
Department of Biochemistry and Structural Biology and Greehey Children’s Cancer Research Institute
,
The University of Texas Health Science Center at San Antonio
Chapters
00:05
Introduction
00:49
Conjugating the 3-Maleimido-PROXYL Nitroxide Spin Label
01:38
Preparing the NMR Sample for Measuring Intramolecular PRE
02:11
Setting Up the NMR Spectrometer and Experiment Specific Parameters
03:51
Setting Up the
1
H
N
–
T
2
Experiment
04:58
Making a Diamagnetic Sample by Reducing Spin-Label with Ascorbic Acid
05:52
Results:
1
H
N
–
T
2
Rates for Residues 171 – 264 of the Intrinsically Disordered Domain of EWSR1
06:30
Conclusion
Summary
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天然変性タンパク質の弱く一過性の分子間および分子内相互作用を検出するための常磁性緩和増強NMR分光法の適用のためのプロトコルが提示されています。
Tags
Paramagnetic Relaxation Enhancement
Intrinsically Disordered Proteins
Biomolecular Interactions
NMR Techniques
Spin Label
15N Isotopically Labeled Protein
Gel Filtration
Ellman’s Reagent
NMR Sample Preparation
Pulse Calibration
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