Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다. 전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Start med at placere et stykke knoglevoks i to cellekulturplader mærket som test og kontrol. Pipette en passende mængde af bioluminescens udtrykke brystkræftceller på hver plade center og inkubere pladerne for en bestemt varighed til støtte celle vedhæftet fil. Placer en lille knogle explant på knoglevoks i testpladen og fastgør den ved at anvende tryk.
Hæld langsomt et cellekulturmedium med føtalt kvægserum, et væksttilskud, til hver pladeside for at nedsænke explanten og inkubere ved 37 grader Celsius i en bestemt varighed. Knoglevævet i testpladen frigiver opløselige faktorer, såsom cytokiner og SRC kinase, som tiltrækker brystkræftceller, hvilket resulterer i deres migration. Tilsæt et substrat til hver plade og læg pladerne på et bioluminescensbilledkammer.
Kræftcellen, der udtrykker bioluminescerende protein, oxiderer substratet og udsender lys. Kvantificer spredning ved at måle de samlede fotoner, der udsendes af hver celle ved hjælp af softwaren. Kræftceller i testpladen skal formere sig hurtigere end cellerne i kontrolpladen. I den følgende protokol, vil vi co-kultur brystkræftceller støder op til lårben knogle explants at måle brystcellespredning.
Til dette eksperiment, forberede en brystkræft celle suspension med 100.000 celler pr 50 mikroliter af DMEM plus 10% FBS. Derudover skal du forberede stik af knoglevoks til immobilisering af knoglefragmenterne. Brug afskårne ender af en micropipette spids, gemme stik i en petriskål. Derefter overføres stikkene til en 6-brønds plade, og ved hjælp af en steril handske overføres stikkene til 12-0-positionen.
Dernæst pipetter 50 mikroliter af celleaffjedringen ind i midten af hver brønd. Placer pladen i en vævskulturinkubator i 45 minutter for at fremme celletilbehør. Mens pladen inkuberer, udtrækkes knoglefragmenterne. Med cellerne fastgjort til pladen, placere knoglevæv fragmenter på knoglevoks i 3 brønde, og tryk hver ned ved hjælp af rongeur. Tre brønde uden fragment tjener som kontrol.
Dernæst langsomt tilføje fem milliliter DMEM plus 10% FBS til væggen i hver brønd. Knoglevoks og knoglefragmenter må ikke løsnes. Derefter inkuberes kulturen i 20 til 24 timer. Næste dag skal du afbilde cellerne. Først tilføje 300 mikrogram per milliliter luciferin til hver brønd, og derefter straks billede pladen med en IVIS imaging Platform.
