Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다. 전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Um zu beginnen, legen Sie eine anästhesierte Maus auf ein chirurgisches Bett und injizieren Buprenorphin, ein Schmerzmittel, um Schmerzen zu lindern, subkutan in die Schulter. Als nächstes legen Sie die Mausnase in eine Nasenmaske ein, um dem Tier eine kontinuierliche Versorgung mit Sauerstoff und Anästhetikum, wie Isofluran, zu gewährleisten. Mit etwas Laborband, immobilisieren Sie die Gliedmaßen und sterilisieren Sie die Brusthaut mit Chlorhexidin und Jod, zwei Desinfektionsmittel, und Ethanol.
Verwenden Sie nun eine Schere, um einen Schnitt in der Mitte der vorderen Brustwand zu machen und die Haut mit Zangen umzukehren, um das weiße Brustfettpad freizulegen. Injizieren Sie vorsichtig die Krebszellsuspension, die ein biolumineszierendes Protein in das Brustfettpad ausdrückt. Warten Sie 5 Sekunden, bevor Sie die Nadel herausziehen, um einen Rückfluss zu verhindern. Lassen Sie das Fettpolster vorsichtig los und verwenden Sie sterile Nähte, um den Schnitt zu nähen und zu schließen.
Die injizierten Krebszellen im Brustfettpad teilen sich schnell und bilden einen Tumor. Bringen Sie das Tier nach dem Eingriff in einen Käfig zurück. Beobachten Sie das Tier genau, bis es sich von der Anästhesie erholt und sich frei bewegt.
Im folgenden Protokoll werden wir Mamma-Adenokarzinom-Zellen implantieren, die Luziferase in das Brustfettpad einer erwachsenen Maus ausdrücken.
Beginnen Sie mit der Bestätigung eines Mangels an Reaktion auf Zehenkneifen in einer anästhesierten weiblichen Maus und kleben Sie die Gliedmaßen des Tieres auf ein chirurgisches Brett. Mit sterilen Wattestäbchen den Operationsbereich mit Chlorhexidin, Jod und 75% Ethanol sterilisieren und einen Fünf-Millimeter-Hautschnitt in der Mitte der vorderen Brustwand machen. Als nächstes heben Sie die rechte Seite der Haut neben dem Schnitt und verwenden Sie sterile Mikrodissektionsschere, um die Haut von der Brustwand zu lösen.
Invertieren Sie die Haut, um das richtige Brustfettpad Nummer zwei freizulegen, und verwenden Sie eine Ein-Milliliter-Insulinspritze, die mit einer 28,5-Meter-Nadel ausgestattet ist, um sorgfältig 20 Mikroliter Krebszellsuspension durch die Wunde in das Fettpolster zu injizieren. Halten Sie die Nadel fünf Sekunden lang im Fettpolster, damit sich die gelatinöse Krebszellproteinmischung vor dem Entfernen der Nadel erstarren lässt und den Schnitt mit sterilen 5-0 nicht resorbierbaren Nähten schließt. Dann legen Sie das Tier in einen sauberen Käfig mit Überwachung bis zur vollen Recumbency.
