דימום פונטין מסיבי על ידי הזרקה כפולה של דם אוטולוגי
Summary
אנו מציגים פרוטוקול להקמת מודל דימום פונטין מסיבי בחולדה באמצעות הזרקה כפולה של דם אוטולוגי.
Abstract
אנו מספקים פרוטוקול להקמת מודל דימום פונטין מסיבי בחולדה. חולדות במשקל של כ 250 גרם שימשו במחקר זה. מאה מיקרוליטרים של דם אוטולוגי נלקחו מווריד הזנב והוזרקו באופן סטראוטקסי לתוך הפוני. תהליך ההזרקה חולק לשני שלבים: ראשית, 10 μL של דם הוזרק למקום מסוים, מיקום anteroposterior (AP) -9.0 מ”מ; לרוחב (לאט) 0 מ”מ; אנכי (Vert) -9.2 מ”מ, ואחריו זריקה שנייה של שאריות הדם הממוקם ב AP -9.0 מ”מ; לאט 0 מ”מ; ורט -9.0 מ”מ עם מרווח זמן של 20 דקות. בדיקת קרן האיזון, בדיקת מיקום הגפיים, ונויקור ווסטץ’ שונה שימשו להערכת תפקוד נוירולוגי. הדמיית תהודה מגנטית (MRI) שימשה להערכת נפח הדימום ב vivo. הסימפטומים של מודל זה היו בקנה אחד עם חולים עם דימום פונטין מסיבי.
Introduction
דימום תוך-מוחי מהווה חמישית מחולי השבץ. הפרוגנוזה של דימום תוך-מוחי תלויה במהירות, בנפח ובמיקום הדימום1,2. בהשוואה לדימום המוחי, דימום גזע המוח יש תמותה גבוהה יותר ותחלואה3. כ -40% מדמם גזע המוח מתרחשת בפונים4. האטיולוגיה והפתופיזיולוגיה של דימום פונטין הם שונים למדי ופחות למד מאשר דימום forebrain5.
ישנם שני סוגים של מודלים של בעלי חיים דימום פונטין. אחד הוא מודל דימום ספונטני המושרה על ידי עירוי של קולגנאז חיידקי ב pons6,7,8. היתרון הגדול ביותר של מודל זה הוא שהדימום הוא ספונטני. עם זאת, קולגנאז יכול רק לגרום נפח קטן של דימום פונטין. חוץ מזה, קולגנאז עלול לגרום לפציעות אחרות במוח. המודל השני הוא המושרה על ידי הזרקה סטריאוטיפית של דם אוטולוגי לתוך pons9. היתרון של מודל זה הוא שקל לשלוט עם אחוזי הצלחה גבוהים. תיאורטית, חוקרים יכולים להזריק כל נפח של דם לכל מיקום של פונס. עם זאת, בשל הדליפה האחורית דרך מסלול המחט, נפח מוזרק מוגבל. לאחרונה, שיטת ההזרקה הכפולה קודמה כדי להפחית את דליפת הגב9. שיטה זו מזריקה דם אוטולוגי פעמיים עם מרווח של 20 דקות בין הזריקות. שיטת ההזרקה הכפולה מוחלת כדי לגרום לדימום פונטין מתון (30 μL) ומתון (60 μL) אך לא דימום פונטין מסיבי. במרפאה, רוב חולי דימום פונטין עם פרוגנוזה ירודה יש דימום מסיבי (יותר מ 10 מ”ל).
במחקר הקודם, סיפקנו פרוטוקול להקים מודל שבץ איסכמי פונטין בחולדה10. במחקר זה, אנו משנים את שיטת ההזרקה הכפולה הקיימת, ומספקים פרוטוקול מפורט כדי לגרום לדימום פונטין מסיבי בחולדה על ידי הזרקה כפולה של 100 μL דם אוטולוגי בשני מקומות שונים pons.
Protocol
Representative Results
Discussion
במחקר הנוכחי, סיפקנו פרוטוקול כדי ליצור מודל עכברוש דימום פונטין מסיבי. מודל זה יכול לשמש למחקר על המנגנון הפתופיזיולוגי והאבחנה של דימום פונטין מסיבי.
במהלך הניסוי נעשה שימוש ב-25 חולדות, שרק אחת מהן מתה. אימות ה-MRI, האנטומיה הגולמית והכתמת ה-HE הצביעו על כך ששיטה זו הייתה בעלת…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
מחקר זה נתמך כספית על ידי הקרן הלאומית למדע של סין (81471181 81870933) ותוכנית המעבדה הפותחת של האוניברסיטה הרפואית של גואנגג’ואו (0506308) ל- Y Jiang, ועל ידי הקרן הלאומית למדע של סין (81701471) והתוכנית המדעית של ועדת הבריאות העירונית של גואנגג’ואו (20191A011083) ל- Z Qiu, ועל ידי הקרן הלאומית למדע של סין (81501009) ל- L.
Materials
| 100ml Saline solution | Guangdong yixiang | 191222201 C1 | Preparing heparin diluent |
| 100μl Microinjector | Shanghai Gaoge | Injection of autologous blood | |
| 1ml Syringe | Jiangsu Zhiyu | 20191014 | Withdraw autologous blood from the tail vein |
| 75% Alcohol | Shandong Lierkang | Disinfection of rat tail | |
| Adhesive tape | Shanghai Jinzhong | Surgicl instruments | |
| Animal anesthesia system | RWD | R510-31S-6 | Inducing and maintaining anesthesia |
| Balance beam | Jiangsu Saiangsi | For neurological deficit scores | |
| Blades | Shanghai Feiying | 74-C | For gross anatomy |
| Bone cement | Shanghai Xinshiji | 20180306 | Surgicl instruments |
| Brain tank | Shenzhen LEIYEA | For gross anatomy | |
| Butorphanol tartrate | Jiangsu Hengrui | For pain management | |
| Electric cranial drill | Nanjing Darwin biotechnology | 20180090018 | Making a burr hole on the skull |
| EP tube | Nantong Surui | Transfer autologous blood | |
| Erythromycin eye cream | Yunnan pharmacy | Eyes protection | |
| HE dye liquor | Solarbio | G1120 | For HE staining |
| Heating pad | Dangerous Jungle | JR01 | Keeping warm |
| Heparin sodium injection | Chengdu Haitong Pharmacal Company | 190701 | Preparing heparin diluent |
| IndoPhors | Guoyao of China | Sterilization | |
| Isoflurane | RWD | 20080701 | Inducing and maintaining anesthesia |
| Light dark box | Jiangsu Saiangsi | For neurological deficit scores | |
| Micro-injection pump | Baoding Leifu | TFD03-01-C | Injection of autologous blood |
| MRI system | Philips | Confirmation of infarction in vivo | |
| Needle holder | Shanghai Jinzhong | J32020 | Surgicl instruments |
| Penicilin | Guoyao of China | Infection Prevention | |
| Q-tips | Jiangxi Songhe | Surgicl instruments | |
| Scalp heedle | Jiangxi Hongda | 20200313 | Withdraw autologous blood from the tail vein |
| Scalpel | Shanghai Kaiyuan | 170902 | Surgicl instruments |
| Shearing scissors | Shanghai Jinzhong | Y00040 | Surgicl instruments |
| Stereotaxic apparatus | RWD | 900-00001-00 | for surgical positioning |
| Surgical towel | Xinxiang Huakangweicai | 20070601 | Surgicl instruments |
| Suture needle | Shanghai Jinzhong | Surgicl instruments | |
| Suture scissors | Shanghai Jinzhong | J25041 | Surgicl instruments |
| Tissue holding forcepts | Shanghai Jinzhong | J31080 | Surgicl instruments |
References
- Charidimou, A., et al. Brain hemorrhage recurrence, small vessel disease type, and cerebral microbleeds: A meta-analysis. Neurology. 89 (8), 820-829 (2017).
- Tao, C., et al. A novel brainstem hemorrhage model by autologous blood infusion in Rat: White Matter Injury, Magnetic Resonance Imaging, and Neurobehavioral features. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 25 (5), 1102-1109 (2016).
- Ichimura, S., et al. Surgical treatment for primary brainstem hemorrhage to improve postoperative functional outcomes. World Neurosurgery. 120, 1289-1294 (2018).
- Behrouz, R. Prognostic factors in pontine haemorrhage: A systematic review. European Stroke Journal. 3 (2), 101-109 (2018).
- Guo, X., et al. Brainstem iron overload and injury in a rat model of brainstem hemorrhage. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 29 (8), 104956 (2020).
- Chung, Y., Haines, S. J. Experimental brain stem surgery. Neurosurgery Clinics of North America. 4 (3), 405-414 (1993).
- Lekic, T., Tang, J., Zhang, J. H. A rat model of pontine hemorrhage. Acta Neurochirurgica Supplement. 105, 135-137 (2008).
- Lekic, T., et al. Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage. Journal of Neurosurgery. 118 (2), 465-477 (2013).
- Shrestha, B. K., et al. Rat brainstem hemorrhage model: Key points to success in modeling. World Neurosurgery. 117, 106-116 (2018).
- Luo, M., Tang, X., Zhu, J., Qiu, Z., Jiang, Y. Establishment of acute pontine infarction in rats by electrical stimulation. Journal of Visualized Experiments. (162), (2020).
- Wu, L., et al. Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model. Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).
