Hemorragia pontina masiva por inyección dual de sangre autóloga
Summary
Presentamos un protocolo para establecer un modelo masivo de la hemorragia del pontine en una rata vía la inyección dual de la sangre autóloga.
Abstract
Proporcionamos un protocolo para establecer un modelo masivo de la hemorragia del pontine en una rata. Las ratas que pesaban cerca de 250 gramos fueron utilizadas en este estudio. Cien microlitros de sangre autóloga fueron tomados de la vena de la cola y estereotáxicamente inyectados en el puente de Varolio. El proceso de inyección se dividió en 2 pasos: En primer lugar, se inyectaron 10 μL de sangre en una ubicación específica, posición anteroposterior (AP) -9,0 mm; lateral (Lat) 0 mm; vertical (Vert) -9,2 mm, seguida de una segunda inyección de la sangre residual localizada en AP -9,0 mm; Lat 0 mm; Vert -9.0 mm con un intervalo de 20 minutos. La prueba del haz de equilibrio, la prueba de colocación del miembro, y el neuroscore modificado de Voestch fueron utilizados para evaluar la función neurológica. La proyección de imagen de resonancia magnética (MRI) fue utilizada para determinar el volumen de hemorragia in vivo. Los síntomas de este modelo estaban en línea con pacientes con hemorragia masiva del pontine.
Introduction
La hemorragia intracerebral explica una quinto de pacientes del movimiento. El pronóstico de la hemorragia intracerebral depende de la velocidad, el volumen y la ubicación del sangrado1,2. En comparación con la hemorragia del cerebro anterior, la hemorragia del tronco encefálico tiene mayor mortalidad y morbilidad3. El cerca de 40% de hemorragia del médula oblonga ocurre en el puente deVarolio 4. La etiología y fisiopatología de la hemorragia pontina son bastante diferentes y menos estudiadas que la hemorragia del cerebro anterior5.
Hay dos tipos de modelos animales de hemorragia pontina. Uno es el modelo de hemorragia espontánea inducida por infusión de colagenasa bacteriana en el puente deVarolio 6,7,8. La mayor ventaja de este modelo es que el sangrado es espontáneo. Sin embargo, la colagenasa puede inducir solamente un pequeño volumen de hemorragia del pontine. Además, la colagenasa podría causar otras lesiones en el cerebro. El otro modelo es inducido por la inyección estereotáctica de sangre autóloga en el puente deVarolio 9. La ventaja de este modelo es que es fácil de dominar con una alta tasa de éxito. Teóricamente, los investigadores podrían inyectar cualquier volumen de sangre en cualquier ubicación de puente de Varolio. Sin embargo, debido a la fuga posterior a través de la ruta de la aguja, el volumen inyectado es limitado. Recientemente, el método de doble inyección se ha promovido para reducir la fuga trasera9. Este método inyecta sangre autóloga dos veces con un intervalo de 20 minutos entre las inyecciones. El método de doble inyección se aplica para inducir hemorragia pontina leve (30 μL) y moderada (60 μL), pero no hemorragia pontina masiva. En la clínica, la mayoría de los pacientes con hemorragia pontina con mal pronóstico tienen hemorragia masiva (más de 10 mL).
En el estudio anterior, proporcionamos un protocolo para establecer un modelo isquémico del movimiento del pontine en la rata10. En este estudio, modificamos el método dual existente de la inyección, y proporcionamos un protocolo detallado para inducir hemorragia masiva del pontine en una rata por la inyección dual de la sangre autóloga del 100 μL en dos diversas localizaciones en el puente de Varolio.
Protocol
Representative Results
Discussion
En el actual estudio, proporcionamos un protocolo para generar un modelo masivo de la rata de la hemorragia del pontine. Este modelo se puede utilizar para la investigación sobre el mecanismo fisiopatológico y el pronóstico de la hemorragia masiva del pontine.
A lo largo del experimento, se utilizaron 25 ratas, de las cuales solo una murió. La verificación de MRI, de la anatomía gruesa, y él que manchaba indicó que este método tenía una tarifa de mortalidad muy baja y una alta tasa d…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este estudio fue apoyado financieramente por la Fundación Nacional de Ciencia de China (81471181 y 81870933) y el Programa de Laboratorio de Apertura de la Universidad Médica de Guangzhou (0506308) a Y Jiang, y por la Fundación Nacional de Ciencia de China (81701471) y el Programa Científico de la Comisión Municipal de Salud de Guangzhou (20191A011083) a Z Qiu, y por la Fundación Nacional de Ciencia de China (81501009) a L Wu.
Materials
| 100ml Saline solution | Guangdong yixiang | 191222201 C1 | Preparing heparin diluent |
| 100μl Microinjector | Shanghai Gaoge | Injection of autologous blood | |
| 1ml Syringe | Jiangsu Zhiyu | 20191014 | Withdraw autologous blood from the tail vein |
| 75% Alcohol | Shandong Lierkang | Disinfection of rat tail | |
| Adhesive tape | Shanghai Jinzhong | Surgicl instruments | |
| Animal anesthesia system | RWD | R510-31S-6 | Inducing and maintaining anesthesia |
| Balance beam | Jiangsu Saiangsi | For neurological deficit scores | |
| Blades | Shanghai Feiying | 74-C | For gross anatomy |
| Bone cement | Shanghai Xinshiji | 20180306 | Surgicl instruments |
| Brain tank | Shenzhen LEIYEA | For gross anatomy | |
| Butorphanol tartrate | Jiangsu Hengrui | For pain management | |
| Electric cranial drill | Nanjing Darwin biotechnology | 20180090018 | Making a burr hole on the skull |
| EP tube | Nantong Surui | Transfer autologous blood | |
| Erythromycin eye cream | Yunnan pharmacy | Eyes protection | |
| HE dye liquor | Solarbio | G1120 | For HE staining |
| Heating pad | Dangerous Jungle | JR01 | Keeping warm |
| Heparin sodium injection | Chengdu Haitong Pharmacal Company | 190701 | Preparing heparin diluent |
| IndoPhors | Guoyao of China | Sterilization | |
| Isoflurane | RWD | 20080701 | Inducing and maintaining anesthesia |
| Light dark box | Jiangsu Saiangsi | For neurological deficit scores | |
| Micro-injection pump | Baoding Leifu | TFD03-01-C | Injection of autologous blood |
| MRI system | Philips | Confirmation of infarction in vivo | |
| Needle holder | Shanghai Jinzhong | J32020 | Surgicl instruments |
| Penicilin | Guoyao of China | Infection Prevention | |
| Q-tips | Jiangxi Songhe | Surgicl instruments | |
| Scalp heedle | Jiangxi Hongda | 20200313 | Withdraw autologous blood from the tail vein |
| Scalpel | Shanghai Kaiyuan | 170902 | Surgicl instruments |
| Shearing scissors | Shanghai Jinzhong | Y00040 | Surgicl instruments |
| Stereotaxic apparatus | RWD | 900-00001-00 | for surgical positioning |
| Surgical towel | Xinxiang Huakangweicai | 20070601 | Surgicl instruments |
| Suture needle | Shanghai Jinzhong | Surgicl instruments | |
| Suture scissors | Shanghai Jinzhong | J25041 | Surgicl instruments |
| Tissue holding forcepts | Shanghai Jinzhong | J31080 | Surgicl instruments |
References
- Charidimou, A., et al. Brain hemorrhage recurrence, small vessel disease type, and cerebral microbleeds: A meta-analysis. Neurology. 89 (8), 820-829 (2017).
- Tao, C., et al. A novel brainstem hemorrhage model by autologous blood infusion in Rat: White Matter Injury, Magnetic Resonance Imaging, and Neurobehavioral features. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 25 (5), 1102-1109 (2016).
- Ichimura, S., et al. Surgical treatment for primary brainstem hemorrhage to improve postoperative functional outcomes. World Neurosurgery. 120, 1289-1294 (2018).
- Behrouz, R. Prognostic factors in pontine haemorrhage: A systematic review. European Stroke Journal. 3 (2), 101-109 (2018).
- Guo, X., et al. Brainstem iron overload and injury in a rat model of brainstem hemorrhage. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 29 (8), 104956 (2020).
- Chung, Y., Haines, S. J. Experimental brain stem surgery. Neurosurgery Clinics of North America. 4 (3), 405-414 (1993).
- Lekic, T., Tang, J., Zhang, J. H. A rat model of pontine hemorrhage. Acta Neurochirurgica Supplement. 105, 135-137 (2008).
- Lekic, T., et al. Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage. Journal of Neurosurgery. 118 (2), 465-477 (2013).
- Shrestha, B. K., et al. Rat brainstem hemorrhage model: Key points to success in modeling. World Neurosurgery. 117, 106-116 (2018).
- Luo, M., Tang, X., Zhu, J., Qiu, Z., Jiang, Y. Establishment of acute pontine infarction in rats by electrical stimulation. Journal of Visualized Experiments. (162), (2020).
- Wu, L., et al. Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model. Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).
