마우스의 Mesenterial 혈관에서의 생체 내에 현미경 백혈구 - 내피 세포와 혈소판 - 백혈구 상호 작용
Summary
This simplified application of intravital microscopy of mesentery veins in mice can be used in different models of inflammation to observe leukocyte-endothelial and platelet-leukocyte interactions.
Abstract
생체 내에 현미경 살아있는 동물에서 다른 상이한 영역에서의 프로세스와 혈관을 조사하는데 사용될 수있는 방법이다. 이 프로토콜에서는, 우리는 장간막 정맥의 생체 내에 현미경을 설명합니다. 이는 생체 내에서 내피 백혈구 작용을 도시 재현 결과 단시간에 행할 수있다. 우리는 내피 세포의 LPS 도전 후 염증 설정을 설명합니다. 그러나이 모델에 하나, 세균 화학 또는 생물학적 같은 염증성 질환의 많은 다른 유형을 적용하고 약물의 관리 및 살아있는 동물에 미치는 직접 효과와 백혈구 채용에 미치는 영향을 조사 할 수 있습니다. 이 프로토콜은 마우스 및 혈관 염증 반응에 미치는 영향의 다른 치료의 숫자에 성공적으로 적용되고있다. 여기서, 우리는 형광 로다 민 6G 이러한 레이블에 의해 백혈구 및 혈소판의 시각화를 설명합니다. 또한, 특정 영상은 PE 될 수 있습니다대상 형광 표지 된 분자를 사용하여 rformed.
Introduction
이 프로토콜의 목적은 염증 조건에서 백혈구 – 내피 백혈구 및 혈소판의 상호 작용의 직접적인 관찰을 위해 쥐를 거주 장간막 정맥의 생체 내에 현미경의 간략화 된 기법을 설명하기위한 것이다.
생체 내에 현미경은 염증 백혈구 모집 및 기능을 이해하는 사소한하지만 중요하지 않은 염증성 질환 1, 2에서 생체 내에서 백혈구 – 내피 상호 작용을 연구하기 위해 개발되었다. 이 프로토콜에서 우리가 설명하는 방법은 이전에 발행 된 출판물을 기반으로 개발되었다. 발표 된 내용에 성장 혈전 3 병렬로 혈소판 통합을 시각화 유사 이전 4 표면화 장간막 정맥은 투과광 현미경으로 검사한다. 이러한 쥐 5 마우스의 간 및 쥐 (6)의 cremaster 근육으로 내 생명 현미경의 다양한 모델이 있습니다.
장간막 정맥의 생체 내에 현미경이 개발되고 여러 그룹에 의해 이전의 연구에 적용되어왔다. – / – 누구의 혈소판 세로토닌 약리학 장기 고갈 된 쥐에 연구 결과 비 신경 세로토닌의 결핍과 비교 마우스, 우리는 야생형 마우스 및 트립토판의 hydroxylase1 (Tph1) 사이의 백혈구 모집의 차이를 관찰하기 위해이 기술을 사용했다 애플리케이션 선택적 세로토닌 재 흡수 억제제 인 플루옥세틴 7. 우리는 또한 급성 플루옥세틴 치료 (8) 후 백혈구 – 내피 상호 작용을 조사 하였다.
이 모델은 신속하게 수행하고, 백혈구 – 내피 백혈구 및 혈소판의 상호 작용의 유효 측정을 허용 할 수 있기 때문 프로토콜에서는, 장간막 정맥의 생체 내에 초점 현미경. 이것은 훨씬 더 어렵고 시간이 소요되는 등의 뼈, 간, 피부, 근육 등 cremaster 또는 다른 장기의 생체 내에 현미경이다. 모드여기에 설명 된 L은 리포 폴리 사카 라이드의 복강 내 주사로 염증 자극, 그것을 challengeing 후 염증 세포 – 세포 상호 작용의 재현성 평가에 이상적입니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기에서 우리는 준비 및 생체 내에서 쥐의 장간막 정맥의 생체 내에 현미경의 성능을 설명합니다. 이 방법은 우리에게 살아있는 유기체에 직접 백혈구가 내피 세포와 혈소판 내피 세포의 상호 작용 (11)을 관찰 할 수있는 기회를 제공합니다.
내피 세포를 염증 초기 반응으로 활성화됩니다 압연, 접착력과 윤회 (12)의 결과 백혈구 및 혈소판과 상호 작용…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported by the Deutsche Forschungsgemeinschaft (DU 1190/3-1).
Materials
| Rhodamine 6G | Sigma-Aldrich | 989-38-8 | |
| Lipopolysaccharides from Escherichia coli 055:B5 | Sigma-Aldrich | L2637 |
References
- Lehr, H. A., Vollmar, B., Vajkoczy, P., Menger, M. D. Intravital fluorescence microscopy for the study of leukocyte interaction with platelets and endothelial cells. Methods in enzymology. 300, 462-481 (1999).
- Atherton, A., Born, G. V. Quantitative investigations of the adhesiveness of circulating polymorphonuclear leucocytes to blood vessel walls. The Journal of physiology. 222, 447-474 (1972).
- Duerschmied, D., et al. Serotonin stimulates platelet receptor shedding by tumor necrosis factor-alpha-converting enzyme (ADAM17). Journal of thrombosis and haemostasis : JTH. 7, 1163-1171 (2009).
- Chauhan, A. K., et al. ADAMTS13: a new link between thrombosis and inflammation. The Journal of experimental medicine. 205, 2065-2074 (1084).
- Baez, S. An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy. Microvascular research. 5, 384-394 (1973).
- Leister, I., et al. A peritoneal cavity chamber for intravital microscopy of the liver under conditions of pneumoperitoneum. Surgical endoscopy. 17, 939-942 (2003).
- Duerschmied, D., et al. Platelet serotonin promotes the recruitment of neutrophils to sites of acute inflammation in mice. Blood. 121, 1008-1015 (2013).
- Herr, N., et al. Acute fluoxetine treatment induces slow rolling of leukocytes on endothelium in mice. PloS one. 9, e88316 (2014).
- Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. Retro-orbital injections in mice. Lab animal. 40, 155-160 (2011).
- Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as routes of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab animal. 37, 26-32 (2008).
- Duerschmied, D., Bode, C., Ahrens, I. Immune functions of platelets. Thrombosis and haemostasis. 112, 678-691 (2014).
- Wagner, D. D., Frenette, P. S. The vessel wall and its interactions. Blood. 111, 5271-5281 (2008).
- Gawaz, M., Fateh-Moghadam, S., Pilz, G., Gurland, H. J., Werdan, K. Platelet activation and interaction with leucocytes in patients with sepsis or multiple organ failure. European journal of clinical investigation. 25, 843-851 (1995).
- Sarma, J., et al. Increased platelet binding to circulating monocytes in acute coronary syndromes. Circulation. 105, 2166-2171 (2002).
- Sumagin, R., Sarelius, I. H. TNF-alpha activation of arterioles and venules alters distribution and levels of ICAM-1 and affects leukocyte-endothelial cell interactions. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 291, H2116-H2125 (2006).
