التفاعلات حيوي داخلي المجهري من خلايا الدم البيضاء-البطانية وصفائح الدم الكريات البيض في المساريقية الأوردة في الفئران
Summary
This simplified application of intravital microscopy of mesentery veins in mice can be used in different models of inflammation to observe leukocyte-endothelial and platelet-leukocyte interactions.
Abstract
intravital المجهري هو طريقة التي يمكن استخدامها للتحقيق في عمليات مختلفة في مناطق مختلفة والسفن في الحيوانات الحية. في هذا البروتوكول، وصفنا intravital المجهري الأوردة مساريق. هذا لا يمكن أن يؤديها في فترة قصيرة من الوقت مع نتائج استنساخه تظهر تفاعلات الكريات البيض البطاني في الجسم الحي. وصفنا بيئة التهابات بعد التحدي LPS من البطانة. ولكن في هذا نموذج واحد يمكن تطبيق العديد من أنواع مختلفة من حالات الالتهابات، مثل بكتيريا أو كيميائية أو بيولوجية والتحقيق في إدارة المخدرات وآثارها المباشرة على الحيوانات الحية وتأثيرها على تجنيد الكريات البيض. وقد تم تطبيق هذا البروتوكول بنجاح لعدد من العلاجات المختلفة من الفئران وآثارها على الاستجابة للالتهابات في الأوعية. هنا، نحن تصف التصور من الكريات البيضاء والصفائح الدموية التي وصفها fluorescently هذه مع رودامين 6G. بالإضافة إلى ذلك، يمكن لأي التصوير معين يكون المؤسسة العامةrformed باستخدام استهداف جزيئات fluorescently المسمى.
Introduction
والغرض من هذا البروتوكول هو لوصف أسلوب مبسط لintravital المجهري الأوردة مساريق في الفئران التي تعيش على الملاحظة المباشرة للتفاعلات الكريات البيض البطانية والكريات البيض الصفيحات في ظل ظروف التهابات.
وقد وضعت intravital المجهري لدراسة التفاعلات الكريات البيض البطاني في الجسم الحي في ظل ظروف التهابات 1،2، وهي ليست تافهة ولكنها مهمة لفهم التوظيف الكريات البيض الالتهابية وظيفة. تم تطوير طريقة وصفنا في هذا البروتوكول على أساس المنشورات التي تم نشرها مسبقا. على غرار تصور الصفائح الدموية التأسيس في خثرة المتزايد 3 وبالتوازي مع ما تم نشره في وقت سابق من 4، يتم فحص لمساريق الوريد exteriorized التي تنتقل عن طريق المجهر الضوئي. وهناك نماذج أخرى مختلفة من المجهري داخل حيوية مثل العضلات المشمرة الجرذان 5 أو كبد الفأر والجرذان 6.
وقد تم تطوير intravital المجهري من مساريق الوريد وتطبيقها في دراسات سابقة من قبل عدة مجموعات. وقد استخدمنا هذه التقنية لمراقبة الاختلافات في التوظيف الكريات البيض بين الفئران نوع البرية وhydroxylase1 تريبتوفان (Tph1) – / – الفئران التي تعاني من نقص السيروتونين غير العصبية ومقارنة النتائج مع الفئران التي تم المنضب دواء من قبل على المدى الطويل السيروتونين الصفائح الدموية تطبيق على امتصاص السيروتونين الانتقائية المانع فلوكستين 7. لقد درست أيضا التفاعلات الكريات البيض البطانية بعد العلاج فلوكستين الحادة 8.
في هذا البروتوكول ونحن نركز على intravital المجهري الأوردة مساريق، لأن هذا النموذج لا يمكن أن يؤديها بسرعة، ويسمح القياسات الصحيحة من التفاعلات الكريات البيض البطانية والصفيحات الكريات البيض. وهذا هو أكثر من ذلك بكثير صعبة وintravital المجهري من الأجهزة الأخرى، مثل العظام والكبد والجلد، أو العضلات المشمرة تستغرق وقتا طويلا. وضعل الموصوفة هنا هو المثل الأعلى للتقييم استنساخه من التهابات التفاعل خلية خلية بعد challengeing مع حافز التهابات، مثل حقن داخل الصفاق من lipopolysaccharide في.
Protocol
Representative Results
Discussion
هنا نحن تصف إعداد وأداء intravital المجهري الأوردة مساريق الفئران في الجسم الحي. هذا الأسلوب يتيح لنا الفرصة لمراقبة الكريات البيض البطانية والصفائح الدموية البطانية التفاعلات 11 مباشرة في الكائن الحي.
كاستجابة مبكرة لالت?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported by the Deutsche Forschungsgemeinschaft (DU 1190/3-1).
Materials
| Rhodamine 6G | Sigma-Aldrich | 989-38-8 | |
| Lipopolysaccharides from Escherichia coli 055:B5 | Sigma-Aldrich | L2637 |
References
- Lehr, H. A., Vollmar, B., Vajkoczy, P., Menger, M. D. Intravital fluorescence microscopy for the study of leukocyte interaction with platelets and endothelial cells. Methods in enzymology. 300, 462-481 (1999).
- Atherton, A., Born, G. V. Quantitative investigations of the adhesiveness of circulating polymorphonuclear leucocytes to blood vessel walls. The Journal of physiology. 222, 447-474 (1972).
- Duerschmied, D., et al. Serotonin stimulates platelet receptor shedding by tumor necrosis factor-alpha-converting enzyme (ADAM17). Journal of thrombosis and haemostasis : JTH. 7, 1163-1171 (2009).
- Chauhan, A. K., et al. ADAMTS13: a new link between thrombosis and inflammation. The Journal of experimental medicine. 205, 2065-2074 (1084).
- Baez, S. An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy. Microvascular research. 5, 384-394 (1973).
- Leister, I., et al. A peritoneal cavity chamber for intravital microscopy of the liver under conditions of pneumoperitoneum. Surgical endoscopy. 17, 939-942 (2003).
- Duerschmied, D., et al. Platelet serotonin promotes the recruitment of neutrophils to sites of acute inflammation in mice. Blood. 121, 1008-1015 (2013).
- Herr, N., et al. Acute fluoxetine treatment induces slow rolling of leukocytes on endothelium in mice. PloS one. 9, e88316 (2014).
- Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. Retro-orbital injections in mice. Lab animal. 40, 155-160 (2011).
- Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as routes of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab animal. 37, 26-32 (2008).
- Duerschmied, D., Bode, C., Ahrens, I. Immune functions of platelets. Thrombosis and haemostasis. 112, 678-691 (2014).
- Wagner, D. D., Frenette, P. S. The vessel wall and its interactions. Blood. 111, 5271-5281 (2008).
- Gawaz, M., Fateh-Moghadam, S., Pilz, G., Gurland, H. J., Werdan, K. Platelet activation and interaction with leucocytes in patients with sepsis or multiple organ failure. European journal of clinical investigation. 25, 843-851 (1995).
- Sarma, J., et al. Increased platelet binding to circulating monocytes in acute coronary syndromes. Circulation. 105, 2166-2171 (2002).
- Sumagin, R., Sarelius, I. H. TNF-alpha activation of arterioles and venules alters distribution and levels of ICAM-1 and affects leukocyte-endothelial cell interactions. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 291, H2116-H2125 (2006).
