Summary

Bioluminescent Bakteriyel Görüntüleme<em> In Vivo</em

Published: November 04, 2012
doi:

Summary

Bu makale idaresi anlatılmaktadır<em> Lux-etiketlendi</em> Fareler bakteri ve sonraki<em> In vivo</emIVIS biyolüminesans görüntüleme kullanılarak> analizi.

Abstract

Bu video kanseri için gen ve hücre tedavisi bakterilerin kullanımı ile ilgili bir vurgu ile, canlı farelerde bakteriyel ticareti çalışma için tüm vücut bioluminesce görüntüleme (BLI) kullanımı anlatılmaktadır. Bakteriler sistemik uygulamayı takiben tümörler içinde tercihen büyümek için doğal bir yeteneği sahip, kanser tedavisi için vektör çekici bir sınıf mevcut. Bakteriler bakteri ve aynı zamanda tümörün sitelerin lux gen kasetinin izni BLI algılama ifade için tasarlanmıştır. Zaman içinde tümörler içinde yer ve bakteri düzeylerini kolayca kontrol edilebilir, iki ya da üç boyutlu olarak gözlemlenmiştir. Yöntem bakteri türleri ve tümör ksenogreft türleri geniş bir aralığı için geçerlidir. Bu makale, subkutan tümör taşıyan fareler içinde biyolüminesans bakteri analizi için protokol açıklanmaktadır. BLI ile gastrointestinal sistem (GIT) içinde bakterilere görselleştirilmesi de tarif edilmektedir. Bu güçlü ve ucuz, gerçek zamanlı görüntüleme stratejisi temsilcisits belirli kanser, özellikle gen tedavisi araştırma, ve enfeksiyöz hastalık bağlamında in vivo bakteri çalışma için ideal bir yöntem. Bu video lux-etiketli E. incelemek için prosedür ana hatlarıyla IVIS sistemi ile mekansal ve zamansal okuma başarılabilir kullanan BLI gösteren canlı farelerde coli.

Protocol

1. Tümör İndüksiyon Rutin tümör indüksiyon için, serum içermeyen kültür ortamı 200 ul içinde süspansiye edilmiş hücreler asgari tümörojenik doz serbest enfeksiyonun yan 6-8 haftalık dişi Balb / C veya atimik fareler içine MF1-nu/nu (sc) deri altından enjekte edilmiştir n 21-gauge enjektör iğnesi kullanarak = 6 (Harlan, Oxfordshire, UK) (1 x 10 6 4T1 hücreleri). Bir haemocytometer ve tripan mavi boyasıyla çıkarma (Gibco) kullanılarak görsel sayımı ile belirlenir olar…

Discussion

Gen terapi bağlamında, hasta için terapötik gen ulaştırılması için biyolojik ajanların kullanımı büyük söz 3-5 göstermiştir. Gibi virüsler, bakteriler ve doğal biyolojik özelliklerini, özellikle kanser bağlamında, hücreler ya da dokulara etkili DNA aktarma izin verir. Bakterilerin doğal olarak yeteneğine sahip olduğu gösterilmiştir için sistemik olarak ya da lokal olarak replikasyon dış, yüksek düzeyde (invazif olmayan türler) ya da tümör hücreleri (patojen) içinde idare…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Yazarlar Avrupa Komisyonu Yedinci Çerçeve Programı (PIOF-GA-2009-255466) ve İrlanda Sağlık Araştırma Kurulu'nun (HRA_POR/2010/138) Bu yazının ilgili destek kabul etmek istiyoruz. Lux etiketli E. coli Dr Cormac Gahan, University College Cork bir tür hediye oldu.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
4T1 cell line ATCC CRL-2539 Syngeneic breast cancer model derived from a spontaneously arising BALB/c mammary tumor
DMEM Sigma-Aldrich D6429 Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium
PBS Sigma-Aldrich D8537 Phosphate Buffered Saline
Xenogen IVIS Caliper Life Sciences   IVIS 100 for 2D imaging; IVIS Spectrum for 3D.
Luria Broth Miller (LB) Sigma-Aldrich L2542 Growth medium for E. coli
Erythromycin Sigma-Aldrich E5389 Antibiotic
Streptomycin Sigma-Aldrich S9137 Antibiotic
MF1nu/nu mice Harlan (UK) 069(nu)/070(nu/+) Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu
Balb/c mice Harlan (UK) 066 Haplotype: H-2d
Gavage needle Vet-tech Solutions (UK) DE009 22G x 38mm straight gavage needle
Syringe for IV injection BD BioSciences 309309 – 1 ml Insulin syringe with 28 G x ½ inch micro-fine IV needle.
Syringe for tumor inoculation Braun 9161376V Omnifix 26 G x ½ inch needle

References

  1. Cronin, M., et al. High resolution in vivo bioluminescent imaging for the study of bacterial tumour targeting. PLoS One. 7, e30940 (2012).
  2. Kuo, C., Coquoz, O., Troy, T. L., Xu, H., Rice, B. W. Three-dimensional reconstruction of in vivo bioluminescent sources based on multispectral imaging. J. Biomed. Opt. 12, 024007 (2007).
  3. Tangney, M., Ahmad, S., Collins, S. A., O’Sullivan, G. C. Gene therapy for prostate cancer. Postgrad Med. 122, 166-180 (2010).
  4. Morrissey, D., O’Sullivan, G. C., Tangney, M. Tumour targeting with systemically administered bacteria. Curr. Gene Ther. 10, 3-14 (2010).
  5. Collins, S. A., et al. Viral vectors in cancer immunotherapy: which vector for which strategy. Curr. Gene Ther. 8, 66-78 (2008).
  6. Yu, Y. A., Zhang, Q., Szalay, A. A. Establishment and characterization of conditions required for tumor colonization by intravenously delivered bacteria. Biotechnol. Bioeng. 100, 567-578 (2008).
  7. Baban, C. K., Cronin, M., O’Hanlon, D., O’Sullivan, G. C., Tangney, M. Bacteria as vectors for gene therapy of cancer. Bioeng. Bugs. 1, 385-394 (2010).
  8. Cronin, M., et al. Orally administered bifidobacteria as vehicles for delivery of agents to systemic tumors. Mol. Ther. 18, 1397-1407 (2010).
  9. van Pijkeren, J. P., et al. A novel Listeria monocytogenes-based DNA delivery system for cancer gene therapy. Hum. Gene Ther. 21, 405-416 (2010).
  10. Ahmad, S., et al. Induction of effective antitumor response after mucosal bacterial vector mediated DNA vaccination with endogenous prostate cancer specific antigen. J. Urol. 186, 687-693 (2011).
  11. Riedel, C. U., et al. Improved luciferase tagging system for Listeria monocytogenes allows real-time monitoring in vivo and in vitro. Appl Environ Microbiol. 73, 3091-3094 (2007).
  12. Cheng, C. M., et al. Tumor-targeting prodrug-activating bacteria for cancer therapy. Cancer Gene Ther. 15, 393-401 (2008).
  13. Foucault, M. L., Thomas, L., Goussard, S., Branchini, B. R., Grillot-Courvalin, C. In vivo bioluminescence imaging for the study of intestinal colonization by Escherichia coli in mice. Appl. Environ. Microbiol. 76, 264-274 (2010).
  14. Collins, S. A., Hiraoka, K., Inagaki, A., Kasahara, N., Tangney, M. PET Imaging For Gene & Cell Therapy. Curr. Gene Ther. , (2012).
  15. Tangney, M., Francis, K. P. In vivo Optical Imaging in Gene & Cell Therapy. Curr. Gene Ther. , (2012).

Play Video

Cite This Article
Baban, C. K., Cronin, M., Akin, A. R., O’Brien, A., Gao, X., Tabirca, S., Francis, K. P., Tangney, M. Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo. J. Vis. Exp. (69), e4318, doi:10.3791/4318 (2012).

View Video