Summary

Bioluminescent Bakterielle Imaging<em> In Vivo</em

Published: November 04, 2012
doi:

Summary

Dieser Artikel beschreibt die Verwaltung von<em> Lux-getaggten</em> Bakterien an Mäusen und anschließende<em> In vivo</em> Analyse mit IVIS Biolumineszenz-Bildgebung.

Abstract

Dieses Video beschreibt den Einsatz des ganzen Körpers bioluminesce Imaging (BLI) für die Untersuchung von bakteriellen Handel mit lebenden Mäusen, mit einem Schwerpunkt auf der Verwendung von Bakterien in der Gen-und Zelltherapie bei Krebs. Bakterien stellen eine attraktive Klasse von Vektor für die Krebstherapie, die über eine natürliche Fähigkeit, vorzugsweise wachsen innerhalb Tumoren nach systemischer Verabreichung. Bakterien entwickelt, um die lux Genkassette Erlaubnis BLI Nachweis der Bakterien und gleichzeitig Tumorstellen auszudrücken. Die Lage und Höhe der Bakterien innerhalb Tumoren im Laufe der Zeit leicht geprüft werden kann, visualisiert in zwei oder drei Dimensionen. Das Verfahren ist für ein breites Spektrum von Bakterien-Spezies und Tumorxenotransplantat Typen. Dieser Artikel beschreibt das Protokoll für die Analyse der Biolumineszenz Bakterien im subkutanen Tumor tragenden Mäusen. Visualisierung von symbiotischer Bakterien im Magen-Darm-Trakt (GIT) von BLI wird ebenfalls beschrieben. Diese leistungsstarke und billig, Bildgebung in Echtzeit Strategie Vertreterts eine ideale Methode zur Untersuchung von Bakterien in vivo im Kontext der Krebsforschung, insbesondere Gentherapie, und Infektionskrankheiten. Dieses Video beschreibt das Verfahren für die Untersuchung lux-markierten E. coli in lebenden Mäusen, zeigt die räumliche und zeitliche Auslesen erreichbaren Nutzung BLI mit dem IVIS System.

Protocol

Ein. Tumorinduktion Für die Routine Tumorinduktion wurde die minimale tumorigenen Dosis von Zellen in 200 ul serumfreiem Kulturmedium suspendiert subkutan (sc) in die Flanke frei von Infektionen 6-8 Wochen alte weibliche Balb / C oder athymischen MF1-nu/nu Mäusen injiziert n = 6 (Harlan, Oxfordshire, UK) (1 x 10 6 4T1-Zellen) mit einer 21-Gauge Injektionsnadel. Die Lebensfähigkeit der Zellen zur Inokulation verwendet wurde, war größer als 95%, wie durch visuelle Zählung mit einem Hämozytomet…

Discussion

Im Rahmen der Gentherapie hat sich die Verwendung von biologischen Agenzien zur Abgabe von therapeutischen Genen für Patienten sehr vielversprechend 3-5 gezeigt. Wie Viren erlauben die angeborenen biologischen Eigenschaften von Bakterien effizienten DNA-Abgabe an Zellen oder Gewebe, insbesondere im Zusammenhang mit Krebserkrankungen. Es hat sich gezeigt, daß Bakterien in der Lage sind natürlich Homing auf Tumoren, wenn systemisch verabreicht, was zu hohen Replikation lokal entweder außerhalb (nicht-invasi…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Die Autoren möchten die Unterstützung in bezug auf dieses Manuskript von der Europäischen Kommission Siebten Rahmenprogramms (PIOF-GA-2009 bis 255.466) und dem Irish Health Research Board (HRA_POR/2010/138) quittieren. Lux-markierten E. coli war eine Art Geschenk von Dr. Cormac Gahan, University College Cork.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
4T1 cell line ATCC CRL-2539 Syngeneic breast cancer model derived from a spontaneously arising BALB/c mammary tumor
DMEM Sigma-Aldrich D6429 Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium
PBS Sigma-Aldrich D8537 Phosphate Buffered Saline
Xenogen IVIS Caliper Life Sciences   IVIS 100 for 2D imaging; IVIS Spectrum for 3D.
Luria Broth Miller (LB) Sigma-Aldrich L2542 Growth medium for E. coli
Erythromycin Sigma-Aldrich E5389 Antibiotic
Streptomycin Sigma-Aldrich S9137 Antibiotic
MF1nu/nu mice Harlan (UK) 069(nu)/070(nu/+) Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu
Balb/c mice Harlan (UK) 066 Haplotype: H-2d
Gavage needle Vet-tech Solutions (UK) DE009 22G x 38mm straight gavage needle
Syringe for IV injection BD BioSciences 309309 – 1 ml Insulin syringe with 28 G x ½ inch micro-fine IV needle.
Syringe for tumor inoculation Braun 9161376V Omnifix 26 G x ½ inch needle

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Cite This Article
Baban, C. K., Cronin, M., Akin, A. R., O’Brien, A., Gao, X., Tabirca, S., Francis, K. P., Tangney, M. Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo. J. Vis. Exp. (69), e4318, doi:10.3791/4318 (2012).

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