이 문서의 관리에 대해 설명합니다<em> 룩스 태그</em> 마우스에 세균 및 이후<em> 생체 내</emIVIS의 bioluminescence 이미징을 사용하여> 분석.
Abstract
이 동영상은 암 유전자 및 세포 치료 박테리아의 사용에 중점을두고, 라이브 쥐 세균 매매의 연구 전신 bioluminesce 이미징 (BLI)의 사용에 대해 설명합니다. 박테리아가 조직 관리에 따라 종양 내에 우선적으로 성장하는 자연 능력을 보유하고 암 치료를위한 벡터의 매력적인 클래스를 제시한다. 박테리아는 박테리아와 동시에 종양 사이트의 럭스 유전자 카세트 허가 BLI 검색을 표현하는 설계. 시간이 지남에 따라 종양 내에 위치와 박테리아의 수준은 쉽게 검토 할 수 있습니다, 2, 3 차원 시각화. 방법은 박테리아 종과 종양 이종 이식 유형의 다양한 적용됩니다. 이 문서는 피하 종양 베어링 마우스에서 발광 생물 박테리아의 분석을위한 프로토콜을 설명합니다. BLI하여 위장관 (GIT)의 공생 박테리아의 시각화도 설명되어 있습니다. 이 강력하고 저렴한, 실시간 이미징 전략 represenTS 암 특정 유전자 치료의 연구, 그리고 전염성 질병의 맥락에서 생체 내 박테리아의 연구를위한 이상적인 방법입니다. 이 동영상은 럭스 태그 E.을 공부에 대한 절차를 설명 IVIS 시스템 공간과 측두엽 판독 달성 활용 BLI을 보여주는 라이브 쥐 대장균.
Protocol
1. 종양 유도 일상적인 종양 유도를 들어, 혈청이없는 배지 200 μl에 떠있는 셀의 최소 tumorigenic 선량은 무료로 감염의 측면 6~8주 세 여성 Balb / C 또는 athymic MF1-nu/nu 마우스로 (SC) 피하 주입 된 N 21 게이지 주사기 바늘을 사용하여 = 6 (할렌, 옥스퍼드 셔, 영국) (1 X 10 6 4T1 세포). 혈구와 Trypan 파랑 염료 제외 (Gibco)를 사용 시각적 개수에 의해 결정으로 접종에 사용되는 세포의 생존 능력?…
Discussion
유전자 치료의 맥락에서 환자에게 치료 유전자 전달을위한 생화학 제제의 사용은 큰 약속 3-5 나타났습니다. 바이러스처럼, 박테리아의 본래 생물학적 특성은 특히 암의 맥락에서, 셀이나 조직에 효율적으로 DNA 전달을 허용합니다. 그것은 박테리아가의 자연스럽게 할 수있는 것으로 표시되었습니다 체계적으로 중 외부 로컬 복제 높은 수준의 (비 침습적 종) 또는 종양 세포 (병원균)에 발?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 유럽위원회 (European Commission) 일곱 번째 프레임 워크 프로그램 (PIOF-GA-2009-255466)와 아일랜드 보건 연구위원회 (HRA_POR/2010/138)에서이 원고에 관련된 지원을 인정하고 싶습니다. 럭스 태그 E. 대장균 박사 코르 막 Gahan, 대학 대학 코르크에서 일종의 선물이었다.
Materials
Name of the reagent
Company
Catalogue number
Comments
4T1 cell line
ATCC
CRL-2539
Syngeneic breast cancer model derived from a spontaneously arising BALB/c mammary tumor
DMEM
Sigma-Aldrich
D6429
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium
PBS
Sigma-Aldrich
D8537
Phosphate Buffered Saline
Xenogen IVIS
Caliper Life Sciences
IVIS 100 for 2D imaging; IVIS Spectrum for 3D.
Luria Broth Miller (LB)
Sigma-Aldrich
L2542
Growth medium for E. coli
Erythromycin
Sigma-Aldrich
E5389
Antibiotic
Streptomycin
Sigma-Aldrich
S9137
Antibiotic
MF1nu/nu mice
Harlan (UK)
069(nu)/070(nu/+)
Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu
Balb/c mice
Harlan (UK)
066
Haplotype: H-2d
Gavage needle
Vet-tech Solutions (UK)
DE009
22G x 38mm straight gavage needle
Syringe for IV injection
BD BioSciences
309309 – 1 ml
Insulin syringe with 28 G x ½ inch micro-fine IV needle.
Baban, C. K., Cronin, M., Akin, A. R., O’Brien, A., Gao, X., Tabirca, S., Francis, K. P., Tangney, M. Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo. J. Vis. Exp. (69), e4318, doi:10.3791/4318 (2012).