Summary

발광 생물 세균 이미징<em> 생체 내</em

Published: November 04, 2012
doi:

Summary

이 문서의 관리에 대해 설명합니다<em> 룩스 태그</em> 마우스에 세균 및 이후<em> 생체 내</emIVIS의 bioluminescence 이미징을 사용하여> 분석.

Abstract

이 동영상은 암 유전자 및 세포 치료 박테리아의 사용에 중점을두고, 라이브 쥐 세균 매매의 연구 전신 bioluminesce 이미징 (BLI)의 사용에 대해 설명합니다. 박테리아가 조직 관리에 따라 종양 내에 우선적으로 성장하는 자연 능력을 보유하고 암 치료를위한 벡터의 매력적인 클래스를 제시한다. 박테리아는 박테리아와 동시에 종양 사이트의 럭스 유전자 카세트 허가 BLI 검색을 표현하는 설계. 시간이 지남에 따라 종양 내에 위치와 박테리아의 수준은 쉽게 검토 할 수 있습니다, 2, 3 차원 시각화. 방법은 박테리아 종과 종양 이종 이식 유형의 다양한 적용됩니다. 이 문서는 피하 종양 베어링 마우스에서 발광 생물 박테리아의 분석을위한 프로토콜을 설명합니다. BLI하여 위장관 (GIT)의 공생 박테리아의 시각화도 설명되어 있습니다. 이 강력하고 저렴한, 실시간 이미징 전략 represenTS 암 특정 유전자 치료의 연구, 그리고 전염성 질병의 맥락에서 생체 내 박테리아의 연구를위한 이상적인 방법입니다. 이 동영상은 럭스 태그 E.을 공부에 대한 절차를 설명 IVIS 시스템 공간과 측두엽 판독 달성 활용 BLI을 보여주는 라이브 쥐 대장균.

Protocol

1. 종양 유도 일상적인 종양 유도를 들어, 혈청이없는 배지 200 μl에 떠있는 셀의 최소 tumorigenic 선량은 무료로 감염의 측면 6~8주 세 여성 Balb / C 또는 athymic MF1-nu/nu 마우스로 (SC) 피하 주입 된 N 21 게이지 주사기 바늘을 사용하여 = 6 (할렌, 옥스퍼드 셔, 영국) (1 X 10 6 4T1 세포). 혈구와 Trypan 파랑 염료 제외 (Gibco)를 사용 시각적 개수에 의해 결정으로 접종에 사용되는 세포의 생존 능력?…

Discussion

유전자 치료의 맥락에서 환자에게 치료 유전자 전달을위한 생화학 제제의 사용은 큰 약속 3-5 나타났습니다. 바이러스처럼, 박테리아의 본래 생물학적 특성은 특히 암의 맥락에서, 셀이나 조직에 효율적으로 DNA 전달을 허용합니다. 그것은 박테리아가의 자연스럽게 할 수있는 것으로 표시되었습니다 체계적으로 중 외부 로컬 복제 높은 수준의 (비 침습적 종) 또는 종양 세포 (병원균)에 발?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

저자는 유럽위원회 (European Commission) 일곱 번째 프레임 워크 프로그램 (PIOF-GA-2009-255466)와 아일랜드 보건 연구위원회 (HRA_POR/2010/138)에서이 원고에 관련된 지원을 인정하고 싶습니다. 럭스 태그 E. 대장균 박사 코르 막 Gahan, 대학 대학 코르크에서 일종의 선물이었다.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
4T1 cell line ATCC CRL-2539 Syngeneic breast cancer model derived from a spontaneously arising BALB/c mammary tumor
DMEM Sigma-Aldrich D6429 Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium
PBS Sigma-Aldrich D8537 Phosphate Buffered Saline
Xenogen IVIS Caliper Life Sciences   IVIS 100 for 2D imaging; IVIS Spectrum for 3D.
Luria Broth Miller (LB) Sigma-Aldrich L2542 Growth medium for E. coli
Erythromycin Sigma-Aldrich E5389 Antibiotic
Streptomycin Sigma-Aldrich S9137 Antibiotic
MF1nu/nu mice Harlan (UK) 069(nu)/070(nu/+) Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu
Balb/c mice Harlan (UK) 066 Haplotype: H-2d
Gavage needle Vet-tech Solutions (UK) DE009 22G x 38mm straight gavage needle
Syringe for IV injection BD BioSciences 309309 – 1 ml Insulin syringe with 28 G x ½ inch micro-fine IV needle.
Syringe for tumor inoculation Braun 9161376V Omnifix 26 G x ½ inch needle

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Baban, C. K., Cronin, M., Akin, A. R., O’Brien, A., Gao, X., Tabirca, S., Francis, K. P., Tangney, M. Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo. J. Vis. Exp. (69), e4318, doi:10.3791/4318 (2012).

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