Der Frosch<em> Xenopus laevis</em> Bietet eine attraktive Alternative Nicht-Säuger-Modell für die Erkundung der Fähigkeit des Hitzeschock-Proteins, wie gp96, Antigen-spezifische CD8 T-Zell-Reaktionen zu fördern. Wir präsentieren Methoden zur Untersuchung<em> In vivo</em> Erleichterung der Cross-Präsentation von Haut-und Tumor-Antigene von gp96.
Wir haben in den Amphibien Xenopus laevis entwickelt eine einzigartige Nicht-Säuger-Modell, um die Fähigkeit bestimmter Hitzeschockproteine (HSP), wie gp96, um Cross-Präsentation von Antigenen beaufsichtigt zu erleichtern und zu entlocken angeborenen und erworbenen T-Zell-Antworten. Xenopus Haut Abstoßungsreaktion Studie bietet eine hervorragende Plattform, um die Fähigkeit des gp96 zu den klassischen MHC-Klasse-Ia (Klasse Ia) eingeschränkte T-Zell-Reaktionen zu entlocken zu studieren. Darüber hinaus die Xenopus-Modell-System bietet auch eine attraktive Alternative zu Mäusen für die Erkundung der Möglichkeit von gp96 zu Reaktionen gegen Tumore, die haben ihre Klasse Ia-Moleküle herunter reguliert dadurch entkommen Immunüberwachung generieren. Kürzlich haben wir ein Adoptiv-Zell-Transfer-Assay in Xenopus-Klone mit peritonealen Leukozyten Antigen-präsentierende Zellen (APC) entwickelt und gezeigt, dass gp96 kann prime CD8 T-Zell-Antworten in vivo gegen Nebenhistokompatibilitätsantigene Haut-Antigene als auch gegen die Xenopus Thymus Tumor 15 / 0, die nicht zum Ausdruck bringt Klasse Ia-Moleküle. Wir beschreiben hier die Methodik einbezogen, um diese Tests, einschließlich der Erhebung, pulsierende und adoptiven Transfer von peritonealen Leukozyten, sowie die Hauttransplantation und Tumortransplantation Assays durchzuführen. Darüber hinaus sind wir auch beschreiben, die Ernte und die Trennung von peripheren Blut Leukozyten für die Durchflusszytometrie und Proliferation Assays, die zur weiteren Charakterisierung der Effektor-Populationen in der Haut Ablehnung und Anti-Tumor-Reaktionen beteiligt ermöglichen eingesetzt.
Die Amphibien Xenopus ist eine einzigartige vielseitige Nicht-Säuger-Modell, um Immunität zu studieren. Seine umfangreichen Einsatz in der biomedizinischen und immunologischen Forschung hat in vielen wichtigen Forschungs-Tools wie der MHC definierten Klone LG-6 und LG-15 sowie verschiedene Zelllinien und monoklonalen Antikörpern ergab. Mit Hilfe dieser Werkzeuge, die wir gegründet haben verschiedene in vitro und in vivo-Tests, die Fähigkeit der Hitzeschock-Proteine wie gp96 potente …
The authors have nothing to disclose.
Der Experte der Tierhaltung durch Tina Martin und David Albright vorgesehen ist, dankbar zu schätzen. Diese Arbeit wurde durch Fördermittel T32-AI-07285 (HN), NIH R25 2GM064133 (TCL), 1R03-HD061671-01, R24-AI-059830-06 vom NIH gefördert.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Reagents needed: | ||||
Amphibian Phosphate Buffered Saline (APBS): | ||||
NaCl, 1.15 g/L | ||||
Na2HPO4, 0.2 g/L | ||||
KH2PO | ||||
10N NaOH | ||||
Tricaine Methane Sulfonate (TMS, MS-222) | Crescent Research Chemicals | CAS#886-86-2 | ||
Sodium bicarbonate | Fisher Scientific | S-233-500 | ||
Histopaque-1077 | Sigma-Aldrich | 10771 | 100ml | |
Heparin Sodium Salt | Sigma-Aldrich | H3149-50KU | ||
Culture medium for Xenopus 15/0 tumors [see 3 for more details]: | ||||
Iscove DMEM basal medium | Gibco-Invitrogen | 11965 | ||
Insulin | ||||
Non-essential amino acids | ||||
Penicillin-streptomycin | ||||
Kanamycin | ||||
Primatone | Sheffield Products Division | |||
β2-mercaptoethanol | ||||
NaHCO3 | ||||
30% double distilled water | ||||
5% featal bovine serum | ||||
20% superantant from a Xenopus kidney cell line A6 | ||||
0.25% of normal Xenopus serum | ||||
Materials and Equipment: | ||||
50 and 15 ml conical centrifuge tubes (sterile) | ||||
25 gauge 5/8 Precision Glide sterile needles | BD | |||
18 gauge 1½ Precision Glide sterile needles | BD | |||
1 ml Tuberculin Slip Tip Syringe sterile | BD | |||
10 ml Slip Tip Syringe sterile | BD | |||
1.5 ml MicroCentrifuge tubes (sterile) | ||||
60 X 15 mm Polystyrene Petri Dishes sterile | Falcon | |||
Razor blades | ||||
25 X 75 mm X 1 mm Premium Microscope Slides | Fisher Scientific | |||
10 cm glass petri dishes | ||||
9″ Pasteur Pipetes Durex Borosilicate Glass Cotton Plugged Disposable | VWR | |||
Tygon tubing | ||||
Two # 5 Swiss Jeweler’s Forceps | Miltex Inc. | |||
Micro Dissecting Spring Scissors McPherson-Vannas straight cutting edge 6 mm | Roboz | |||
Helios calipers | ||||
Dissecting microscope | ||||
High intensity illuminator | ||||
Hemacytometer | ||||
Un-bunsen burner | ||||
37°C shaking incubator | ||||
Centrifuge |