Summary

급성 상피 헤르페스의 예 VIVO Organotypic 각막 모델은 바이러스 종류 나 감염을 단순

Published: November 03, 2012
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Summary

이 동영상 글에서 우리는 새로운의 사용을 설명<em> 예 생체</em급성 헤르페스의> 모델은 바이러스 유형 I 각막 상피​​ 감염을 단순.

Abstract

헤르페스 각막염은 헤르페스 심플 바이러스 타입 1 (HSV-1)과 관련된 가장 심각한 pathologies 중 하나입니다. 헤르페스 각막염은 현재 선진국에서 모두 각막 – 파생 및 감염 관련 실명의 가장 큰 원인입니다. 헤르페스 각막염의 전형적인 프리젠 테이션, 흉터 등 영구적 인 각막 pathologies로 이어지는 시닝, 그리고 불투명도 1, 각막 상피의 감염, 때로는 깊은 각막 기질과 내피가 포함되어 있습니다.

각막 HSV-1 감염은 전통적으로 실험 모델의 두 가지 유형에서 공부하고 있습니다. 각막 상피 세포의 배양 monolayers는 배양 접시에 감염되는 체외 모델에이 간단, replicability의 높은 수준, 빠른 실험, 그리고 상대적으로 낮은 비용을 제공합니다. 한편, 토끼 나 쥐와 같은 동물이 각막에 직접 주사되는 생체 모델에는 매우 복잡한 생리를 제공합니다시스템,하지만 높은 비용, 더 이상 실험 필요한 동물 보호, 그리고 변화의 큰 학위를 취득했습니다.

이 비디오 문서에서는, 우리는 생체 모델의 체외과 모두의 장점을 결합하여 각막 상피 HSV-1 감염의 새로운 전직의 생체 모델에 대한 자세한 데모를 제공합니다. 예 생체 모델은 organotypically 문화에 유지 관리 및 HSV-1에 감염된 그대로 각막을 활용합니다. 예 생체 모델의 사용은 높은 생리 학적 기반의 결론은 가능하지만 그건 오히려 저렴하고 체외 모델에서의 비교 시간 약속을해야합니다.

Protocol

모든 시약 및 장비 무균 구입 또는 이전 절차 살균되었다. 이 문서는 미리 enucleated 눈으로 시작 전 생체 모델을 설정하는 단계를 설명합니다. 우리의 실험에서, 우리는 젊은 (8-12 wks) 흰둥이 토끼 (펠 – Freez 체액, 로저스, AR)에서 신선한 전체 눈알을 사용합니다. 또한, 우리는 지역 안구 은행에서 얻은 인간의 각막을 사용합니다. 핵의 제거를 직접 수행하는 경우, 절차를 수행하는 동안 각막 또…

Discussion

이 동영상 글에서 우리는 전직 생체 모델에서 급성 각막 상피 HSV-1 감염을 공부하는 방법을 설명합니다. 이 세포 배양 결과의 생리 학적 정확한 검증 가능하며,이를 통해, 수행해야합니다 동물 실험의 양을 제한하기 때문에이 모델은, 생체 모델의 체외에서와 사이에 유용한 스테핑 돌입니다. 또한, 전 생체 모델은 그대로 인간의 각막 상피에 헤르페스 감염을 연구 할 수?…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

델라웨어 밸리의 라이온스 안구 은행의 지원은이 작품을 위해 귀중한했습니다. ICP8에 대한 기본 마우스 단클론 항체 박사 데이비드 Knipe (하버드 의과 대학)에서 일종의 선물이었다. 우리는 또한 도움이 토론과 전문 지식에 대한 박사 스티븐 제닝스 (의학 Drexel 대학 대학) 박사 피터 Laibson (유언장 안구 연구소)을 감사드립니다.

Materials

Reagents/Supplies Company Catalogue #
Minimum Essential Medium (MEM) Mediatech 10-010-CV
Non-Essential Amino Acids (100x solution) Mediatech 25-025-CI
L-Glutamine Mediatech 25-005-CI
Penicillin G Sodium Salt Sigma P3032
Streptomycin Sulfate Salt Sigma S9137
Agarose Invitrogen 15510-027
Phosphate Buffered Saline (PBS) Prepared in lab N/A
Trypsin EDTA (1x) Mediatech 25-053-CI
DNeasy Blood & Tissue Kit QIAGEN 69504
RNeasy Mini Kit QIAGEN 74104
Laemmli Buffer Prepared in lab N/A
Optimal Cutting Temperature (OCT) Compound Tissue-Tek 4583
Whole Rabbit Eyes (Young) Pel-Freez 41211-2
Human Corneas and Whole Eyes Local Eye Bank N/A
12 Well Porcelain Spot Plate Avogadro’s Lab Supply 1877
35 mm Tissue Culture Dish Falcon 353001
6 Well Cell Culture Plate Greiner Bio-One 657160
Cryomold Intermediate Tissue-Tek 4566

References

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Citer Cet Article
Alekseev, O., Tran, A. H., Azizkhan-Clifford, J. Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection. J. Vis. Exp. (69), e3631, doi:10.3791/3631 (2012).

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