Summary

Ex Vivo modèle organotypique cornéenne aiguë de l'herpès simplex virus type épithéliales je infection

Published: November 03, 2012
doi:

Summary

Dans cet article, nous décrivons vidéo l'utilisation d'une nouvelle<em> Ex vivo</em> Modèle de l'herpès simplex virus de type aiguës je cornée infection épithéliale.

Abstract

Kératite herpétique est une des pathologies les plus sévères associés au virus de l'herpès simplex de type 1 (HSV-1). Kératite herpétique est actuellement la principale cause de cécité cornéenne deux dérivés et associée à l'infection dans le monde développé. Présentation typique de kératite herpétique comprend également l'infection de l'épithélium cornéen et parfois le stroma cornéen profond et l'endothélium, conduisant à de telles pathologies cornéennes permanents comme des cicatrices, l'éclaircissage et l'opacité 1.

Cornée infection HSV-1 est traditionnellement étudiée dans deux types de modèles expérimentaux. Le modèle de vitro, dans lequel monocouches de culture de cellules épithéliales cornéennes sont infectées dans une boîte de Pétri, offre simplicité, niveau élevé de reproductibilité, des expériences rapides et des coûts relativement faibles. D'autre part, le modèle in vivo, dans lesquelles les animaux comme les lapins ou les souris sont inoculés directement dans la cornée, propose un état ​​physiologique hautement sophistiquésystème, mais coûte plus cher, plus les expériences, les soins aux animaux nécessaires, et un plus grand degré de variabilité.

Dans cet article, vidéo, nous fournissons une démonstration détaillée d'un modèle ex vivo nouvelle épithélium cornéen infection HSV-1, qui combine les forces des deux in vitro et la le des modèles in vivo. Le modèle ex vivo utilise des cornées intactes organotypically maintenues en culture et infectées par le HSV-1. L'utilisation du modèle ex vivo permet de tirer des conclusions très base physiologique, mais il est assez peu coûteux et exige un engagement de temps comparable à celle du modèle de vitro.

Protocol

Tous les réactifs et du matériel ont été achetés stérile ou ont été stérilisés avant la procédure. Cet article décrit les étapes de mise en place du modèle ex vivo en commençant par un œil énucléé avant. Dans nos expériences, nous utilisons de nouveaux globes oculaires entières de jeunes (8-12 semaines) lapins albinos (Pel-Freez Biologicals, Rogers, AR). En outre, nous utilisons des cornées humaines obtenues à partir de la banque des yeux locale. Si vous effectuez vous-même l'énucl?…

Discussion

Dans cet article, vidéo, nous décrivons une méthode pour étudier aiguë épithélium cornéen infection HSV-1 dans un modèle ex vivo. Ce modèle est un tremplin utile entre le in vitro et dans des modèles in vivo de l', car elle permet de valider physiologiquement précise des résultats de culture cellulaire et, par conséquent, limite le montant de l'expérimentation animale qui doit être effectuée. En outre, le modèle ex vivo fournit une occasion unique et…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

L'appui de la Banque d'yeux des Lions du Delaware Valley a été inestimable pour ce travail. Anticorps de souris monoclonal primaire contre ICP8 était un gentil cadeau du Dr David Knipe (Harvard Medical School). Nous remercions également le Dr Stephen Jennings (Drexel University College of Medicine) et le Dr Peter Laibson (Wills Eye Institute) pour des discussions utiles et d'expertise.

Materials

Reagents/Supplies Company Catalogue #
Minimum Essential Medium (MEM) Mediatech 10-010-CV
Non-Essential Amino Acids (100x solution) Mediatech 25-025-CI
L-Glutamine Mediatech 25-005-CI
Penicillin G Sodium Salt Sigma P3032
Streptomycin Sulfate Salt Sigma S9137
Agarose Invitrogen 15510-027
Phosphate Buffered Saline (PBS) Prepared in lab N/A
Trypsin EDTA (1x) Mediatech 25-053-CI
DNeasy Blood & Tissue Kit QIAGEN 69504
RNeasy Mini Kit QIAGEN 74104
Laemmli Buffer Prepared in lab N/A
Optimal Cutting Temperature (OCT) Compound Tissue-Tek 4583
Whole Rabbit Eyes (Young) Pel-Freez 41211-2
Human Corneas and Whole Eyes Local Eye Bank N/A
12 Well Porcelain Spot Plate Avogadro’s Lab Supply 1877
35 mm Tissue Culture Dish Falcon 353001
6 Well Cell Culture Plate Greiner Bio-One 657160
Cryomold Intermediate Tissue-Tek 4566

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Citer Cet Article
Alekseev, O., Tran, A. H., Azizkhan-Clifford, J. Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection. J. Vis. Exp. (69), e3631, doi:10.3791/3631 (2012).

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