Ex Vivo Organotypische Corneal model van acute Epitheliale Herpes Simplex Virus Type I infectie
Summary
In deze video artikel beschrijven we het gebruik van een nieuw<em> Ex vivo</em> Model van acute herpes simplex virus type I cornea-epitheel infectie.
Abstract
Herpes keratitis is een van de meest ernstige pathologieën geassocieerd met het herpes simplex virus type 1 (HSV-1). Herpes keratitis is momenteel de belangrijkste oorzaak van zowel hoornvlies-afgeleid en infectie-geassocieerde blindheid in de ontwikkelde wereld. Typische presentatie van herpes keratitis omvat infectie van het hoornvliesepitheel en soms de diepere hoornvlies stroma en endotheel, wat leidt tot die vaste hoornvlies pathologieën zoals littekens, dunner, en de dekking 1.
Cornea HSV-1 infectie wordt traditioneel bestudeerd in twee soorten experimentele modellen. De in vitro model, waarin gekweekte monolagen van corneale epitheelcellen geïnfecteerd in een petrischaal, biedt eenvoud, hoge reproduceerbaarheid, snelle experimenten en relatief lage kosten. Anderzijds, het in vivo model, waarbij dieren zoals konijnen of muizen rechtstreeks geïnoculeerd in het hoornvlies, biedt een zeer geavanceerde fysiologischesysteem, maar heeft hogere kosten, meer experimenten nodig dierverzorging en een hogere variabiliteit.
In deze video artikel we een gedetailleerde demonstratie van een nieuwe ex vivo model van hoornvliesepitheel HSV-1 infectie, die de kracht van beide de in vitro en in vivo modellen combineert. De ex vivo model gebruikt intact cornea organotypically in kweek gehouden en geïnfecteerd met HSV-1. Het gebruik van het ex vivo model maakt zeer fysiologisch gebaseerde conclusies, nog tamelijk goedkoop en vereist tijdsbesteding vergelijkbaar met die van de in vitro model.
Protocol
Discussion
In dit artikel video beschrijven we een methode voor het bestuderen acute hoornvliesepitheel HSV-1 infectie in een ex vivo model. Dit is een nuttig stap tussen de in vitro en in vivo modellen, omdat daardoor fysiologisch accurate validatie van cel kweek en daarmee beperkt de hoeveelheid dierproeven die moeten worden uitgevoerd. Bovendien is de ex vivo model een unieke en waardevolle gelegenheid aan epitheliale herpes infectie bestuderen intact menselijk hoornvlies. Hieronder …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
De steun van de Lions Eye Bank van Delaware Valley was van onschatbare waarde voor dit werk. Primaire muis monoklonaal antilichaam tegen ICP8 was een vriendelijke gift van Dr David Knipe (Harvard Medical School). We danken ook dr. Stephen Jennings (Drexel University College of Medicine) en dr. Peter Laibson (Wills Eye Institute) voor nuttige discussies en expertise.
Materials
| Reagents/Supplies | Company | Catalogue # |
| Minimum Essential Medium (MEM) | Mediatech | 10-010-CV |
| Non-Essential Amino Acids (100x solution) | Mediatech | 25-025-CI |
| L-Glutamine | Mediatech | 25-005-CI |
| Penicillin G Sodium Salt | Sigma | P3032 |
| Streptomycin Sulfate Salt | Sigma | S9137 |
| Agarose | Invitrogen | 15510-027 |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Prepared in lab | N/A |
| Trypsin EDTA (1x) | Mediatech | 25-053-CI |
| DNeasy Blood & Tissue Kit | QIAGEN | 69504 |
| RNeasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 |
| Laemmli Buffer | Prepared in lab | N/A |
| Optimal Cutting Temperature (OCT) Compound | Tissue-Tek | 4583 |
| Whole Rabbit Eyes (Young) | Pel-Freez | 41211-2 |
| Human Corneas and Whole Eyes | Local Eye Bank | N/A |
| 12 Well Porcelain Spot Plate | Avogadro’s Lab Supply | 1877 |
| 35 mm Tissue Culture Dish | Falcon | 353001 |
| 6 Well Cell Culture Plate | Greiner Bio-One | 657160 |
| Cryomold Intermediate | Tissue-Tek | 4566 |
References
- Kaye, S., Choudhary, A. Herpes simplex keratitis. Prog. Retin. Eye Res. 25, 355-380 (2006).
- Holmberg, B. J. Enucleation of exotic pets. Journal of Exotic Pet Medicine. 16, 88-94 (2007).
- Remeijer, L., Osterhaus, A., Verjans, G. Human herpes simplex virus keratitis: the pathogenesis revisited. Ocul. Immunol. Inflamm. 12, 255-285 (2004).
- Foreman, D. M., Pancholi, S., Jarvis-Evans, J., McLeod, D., Boulton, M. E. A simple organ culture model for assessing the effects of growth factors on corneal re-epithelialization. Exp. Eye Res. 62, 555-564 (1996).
- Xu, K. P., Li, X. F., Yu, F. S. Corneal organ culture model for assessing epithelial responses to surfactants. Toxicol. Sci. 58, 306-314 (2000).
- Klausner, E. A., Peer, D., Chapman, R. L., Multack, R. F., Andurkar, S. V. Corneal gene therapy. J. Control Release. 124, 107-133 (2007).
- Halford, W. P. ICP0 antagonizes Stat 1-dependent repression of herpes simplex virus: implications for the regulation of viral latency. Virol. J. 3, 44 (2006).
- Bhattacharjee, P. S. Effective treatment of ocular HSK with a human apolipoprotein E mimetic peptide in a mouse eye model. Invest Ophthalmol Vis. Sci. 49, 4263-4268 (2008).
- Novitskaya, E. S. Difficulties imaging herpes simplex keratitis with fluorescein isothiocynate-labeled anti-HSV-1 antibodies in an ex vivo model. Cornea. 28, 421-425 (2009).
- Sharma, A., Shimeld, C. In vivo immunofluorescence to diagnose herpes simplex virus keratitis in mice. Br. J. Ophthalmol. 81, 785-788 (1997).
